黄芪多糖调控多胺介导的Ca 2+ -RhoA通路促进小肠上皮细胞迁移研究

目的考察黄芪多糖对小肠上皮细胞（IEC-6）迁移及迁移过程细胞内多胺水平、细胞质游离钙离子（[Ca 2+ ] cyto ）的量、细胞骨架蛋白RhoA表达的影响，探讨黄芪修复胃肠黏膜损伤的疗效机制。 方法黄芪药材经水提醇沉、Sevage法去蛋白后得到黄芪粗多糖，运用DEAE纤维素柱分离得到黄芪多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，黄芪多糖Ⅰ以Sephadex LH-20凝胶柱色谱得到黄芪多糖Ⅴ。Tips划痕法建立IEC-6细胞损伤迁移模型，柱前衍生高效液相色谱法测定多胺的量，流式细胞仪检测[Ca 2+ ] cyto 水平，Western blotting法检测RhoA蛋白表达。考察黄芪多糖对正常IEC-6细胞[未加α-二氟甲基鸟氨酸（DFMO）]和多胺耗竭IEC-6细胞（加入DFMO）迁移、多胺水平、[Ca 2+ ] cyto 的量及RhoA蛋白表达的影响。 结果黄芪粗多糖、黄芪多糖Ⅰ、黄芪多糖Ⅴ（50、100、200 mg/L）均能促进IEC-6细胞迁移（ P P P 2+ ] cyto 水平（ P 2+ ] cyto 水平下降（ P < 0.01）；黄芪多糖Ⅴ（100、200 mg/L）可明显提高RhoA蛋白表达，同时可逆转DFMO所导致的RhoA蛋白表达抑制作用。 结论黄芪多糖可加速胃肠黏膜损伤早期修复过程，其机制可能与增加黏膜上皮细胞多胺的量，提升[Ca 2+ ] cyto ，从而提高RhoA蛋白表达，进而促进胃肠黏膜上皮细胞迁移有关。