RT-PCR multiplex para la detección simultánea de las mutaciones FLT3-ITD/NPM-1/AML1-ETO asociadas a Leucemia Mieloide Aguda

espanolLa Leucemia Mieloide Aguda (LMA) representa un grupo de neoplasias muy heterogeneo. Las aberraciones citogeneticas detectadas en el momento del diagnostico son el marcador pronostico mas comunmente utilizado. Sin embargo, el 20% de los casos de LMA presentan un cariotipo normal. Dentro de este grupo de pacientes la presencia de mutaciones del tipo FLT3-ITD se considera de mal pronostico. Sin embargo, la presencia de la mutacion NMP1 o AML1-ETO se asocia a un mejor pronostico. En este contexto, el objetivo de este trabajo es el desarrollo de una tecnica de diagnostico molecular hematologico, que permita la deteccion simultanea de mutaciones para estos tres genes. Hemos desarrollado un metodo basado en la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) que permite amplificar y visualizar simultaneamente estos 3 marcadores tanto desde ARN (un paso) como desde ADNc (dos pasos). De las 28 muestras analizadas, 6 (21,42 %) muestras fueron positivas para FLT3-ITD, 7 para NPM-1 (25%) y otras 4 (14,28) para AML1-ETO. Al comparar ambos metodos (ADNc vs ARN) con metodos convencionales los resultados de las 28 muestras estudiadas fue equivalente en el 100% de los casos, demostrando la robustez de los mismos. EnglishAcute Myeloid Leukemia (AML) is a heterogeneous group of neoplasms. The cytogenetic aberrations detected at the time of diagnosis are most commonly used as prognostic marker. However, 20% of AML patients exhibit a normal karyotype. Within this group of patients the presence of FLT3 -ITD mutations type is considered of poor prognosis. However, the presence of AML1 –ETO or NMP-1 or mutation is associated with a better prognosis. In this context, the aim of this work is to develop a technique of molecular diagnostic in hematology, allowing the simultaneous detection of mutations for these three genes. We have developed a method based on PCR that simultaneously amplifies and visualizes these three molecular markers both from RNA (one- step) and from cDNA (step two). Of the 28 samples tested, 6 (21.42%) samples were positive for FLT3 -ITD, 7 for NPM- 1 (25% ) and 4 ( 14,28 ) for AML1 -ETO . When comparing the two methods (cDNA vs RNA) by conventional techniques the obtained results from the 28 samples tested was equivalent in 100% of cases, demonstrating the robustness of this development.