表皮葡萄球菌PhoU同源物（SERP0316）的抗体制备及免疫鉴定

表皮葡萄球菌可在植入性医疗材料表面形成生物膜，对多种抗生素耐受，而持留菌的形成是导致细菌生物膜耐药的原因之一。研究发现，大肠埃希菌中PhoU可影响持留菌的形成，与细菌对多种抗生素及压力条件的耐受相关，但表皮葡萄球菌中PhoU的功能仍不清楚。生物信息学分析显示，在表皮葡萄球菌中存在2个phoU同源基因，其中serp0956位于pst操纵子中，命名为phoUl；另一个编码功能未知蛋白的phoU基因同源物（serp0316）命名为phoU2。前期研究显示，敲除phoUl并不影响表皮葡萄球菌生长、生物膜形成等生物学特性，为此本研究对PhoU2进行了初步探讨。利用实时荧光定量反转录．聚合酶链反应（RT—PCR）检测phoU2基因在表皮葡萄球菌SEl457不同生长时期的转录水平，发现其在细菌生长不同时间点持续表达，其中对数期（6h）表达量相对较高。为进一步研究表皮葡萄球菌中PhoU2的表达情况，对PhoU2蛋白进行原核表达和纯化，并用纯化的重组PhoU2蛋白免疫小鼠制备PhoU2多克隆抗体。在此基础上，利用蛋白免疫印迹法检测PhoU2在SEl457菌株不同生长时间点的表达水平，结果显示PhoU2在细菌生长对数期和平台期均有表达。另外，在不同的表皮葡萄球菌临床分离株中均检测到PhoU2蛋白表达，表明PhoU2具有一定的保守性。以上研究提示，PhoU2可能作为PhoU的功能同源物发挥一定的作用，为进一步研究表皮葡萄球菌PhoU2的生物学功能及其在生物膜和持留菌形成中的作用奠定了基础。