AVALIAÇÃO DA SENSIBILIDADE A ANTIBIÓTICOS EM CEPAS DE BRADYRHIZOBIUM SPP. E RHIZOBIUM SPP.

A reducao de nitrogenio atmosferico (N2) para amonia (NH3) pela fixacao de nitrogenio fornece boa parte do nitrogenio disponivel na biosfera. A maior parte dessa amonia e produzida na relacao simbiotica entre leguminosas e bacterias do tipo rizobio. Por possuirem funcoes como essa, a transformacao genetica de bacterias de relacoes simbioticas com plantas e muito interessante, tornando possivel a expressao de outros genes atraves de tecnicas de transferencia de DNA, como a eletroporacao. Para selecionar e identificar celulas transformadas geneticamente, genes marcadores sao utilizados, conferindo as celulas transformadas resistencia a determinados agentes seletivos, como antibioticos. Sabendo disso, o objetivo desse trabalho foi testar e comparar o crescimento de diferentes cepas de Rhizobium loti, Rhizobium melioti e Bradyrhizobium spp. frente a diferentes antibioticos para posteriormente utilizar os dados obtidos em estudos de transformacao genetica. Para o teste de crescimento bacteriano, utilizaram-se seis antibioticos com concentracoes distintas, sendo eles amoxicilina (20 µg/mL), ampicilina (50 µg/mL), azitromicina (15 µg/mL), penicilina (10 U.I /mL), estreptomicina (30 µg/mL) e cloranfenicol (170 µg/mL). Os antibioticos foram misturados separadamente, cada qual em seu proprio meio de cultura YM (Yeast Manitol) solido, que foram distribuidos em placas de Petri. As cepas de Rhizobium loti (SEMIA 806 e 816), de Rhizobium melioti (SEMIA 134 e 135) e de Bradyrhizobium spp. (SEMIA 5079 - 5080 / 6156 - 6158) foram inoculadas nas placas e, como controle de eficiencia, foi utilizada a Escherichia coli selvagem. Todas as placas foram incubadas a 28oC por 24h. O antibiotico que se apresentou mais eficiente para futuras transformacoes foi a Azitromicina. Esse antibiotico causa a ausencia de crescimento em 100% das bacterias testadas. Seguidos da Azitromicina, ficaram os antibioticos Ampicilina e Amoxicilina, com crescimento microbiano registrado em apenas 25% das cepas de rizobio. Portanto, dentre os antibioticos testados, concluimos que a Azitromicina apresenta potencial de uso para testes futuros pois nao causa a expressao de resistencia na totalidade das rizobacterias testadas, sendo ideal para selecionar organismos modificados apos a tecnica de transformacao genica, que seleciona os transformados atraves da conferencia de resistencia e, portanto, a presenca de crescimento microbiano.