P215: Régulation du turnover protéique des cellules musculaires en situation d’agression

Introduction et but de l’etude En situation hypercatabolique, la modulation de l’equilibre entre proteosynthese et proteolyse musculaires, en faveur de la proteolyse, permet la liberation d’acides amines et leur utilisation comme source energetique, directement ou indirectement (via la neoglucogenese hepatique). Ce processus est en partie medie par l’action des glucocorticoides et amplifie par des cytokines pro-inflammatoires, liberees en reponse a l’agression. Toutefois cela n’a jamais ete etudie a l’echelon du myocyte, in vitro. C’est pourquoi nous nous sommes interesses a l’action de la dexamethasone (Dex, glucocorticoide de synthese) et du TNFα (cytokine pro-inflammatoire) sur le turnover proteique dans des cellules musculaires en culture. Materiel et methodes Une lignee murine C2C12 et des cellules primaires issues de muscle de souris ont ete utilisees pour notre etude. Les myotubes, obtenus par differentiation des myoblastes, ont ete traites avec de la Dex a 150 nM ou du TNFα a 10 ng/ml ou avec Dex et TNFα simultanement pendant 24 heures. La proteosynthese globale a ete mesuree par incorporation de puromycine 1 μ M (methode SUnSET). Les resultats obtenus ont ete rapportes a la quantite de proteines totales (unite arbitraire, UA). La mesure de la liberation de tyrosine, acide amine non metabolise dans le myocyte, dans le milieu de culture par chromatographie d’echange d’ions, a permis de mesurer la proteolyse. Les resultats sont presentes en μmol/l. Un test ANOVA suivie d’un test PLSD-Ficher a ete utilise pour l’analyse statistique. Resultats et Analyse statistique Proteosynthese : Dans les cultures primaires de myocytes, apres quantification et analyse des blots, les resultats montrent que la Dex et le TNF-α utilises seuls entrainent une diminution significative de la synthese proteique par rapport au groupe controle (Dex : 18 063 ± 2 691 vs controle : 48 675 ± 2 756, p = 0,001 ; TNF-α : 29 567 ± 5 587 vs controle : 48 675 ± 2 756, p = 0,034) (n = 3, experimentations independantes). Le melange de Dex et de TNF-α n’induit qu’une diminution non significative de la synthese proteique par rapport au groupe controle. Proteolyse : La concentration en tyrosine dans le milieu apres 24 heures d’incubation est augmentee de maniere significative par rapport au groupe controle quelle que soit la condition d’agression (Dex : 214 ± 2, TNF : 213 ± 1,4 et DexTNF : 216 ± 0,8 vs controle : 206 ± 0,8, p  vs controle). Conclusion La Dex ou le TNFα seuls entrainent une diminution de la proteosynthese et une augmentation de la proteolyse musculaire, mais lorsqu’ils sont presents simultanement n’induisent pas d’effet significatif sur la proteosynthese et ne majorent pas la proteolyse par rapport a leur action individuelle. Ainsi, la synergie entre corticoides et cytokines observee in vivo et ex vivo resulte vraisemblablement d’un dialogue (cross talk) entre myocytes d’une part et macrophages et/ou adipocytes musculaires d’autre part.