Seleção, caracterização e clonagem dos genes fljB e groEL agonistas dos receptores de reconhecimento de padrão do sistema imune inato das aves

A producao recombinante de agonistas dos receptores do reconhecimento de padrao do sistema imune inato tem fornecido uma nova ferramenta para a producao de imunoestimulantes para animais. O padrao molecular associado ao patogeno (PAMP), flagelina, codificado pelo gene fljB de Salmonella Typhimurium e o padrao molecular associado ao dano (DAMP) HSP60, codificado pelo gene groEL da S. Typhimurium e S. Enteritidis, sao reconhecidos por receptores de reconhecimento de padroes (RRPs) do sistema imune inato das aves. No presente estudo, foi feita a clonagem de fragmentos geneticos dos genes fljB de S. Typhimurium e groEL de S. Typhimurium e S. Enteritidis inseridos no vetor de expressao pET100/D-TOPO e transformados em celulas de E. coli TOP10. Os clones foram avaliados pela PCR de colonia, PCR de DNA plasmidial e sequenciamento genomico para a confirmacao da presenca desses genes. Na PCR de colonia, foram identificadas em 80%, 60% e 80% das colonias transformadas, a presenca dos genes groEL (S. Enteritidis), groEL (S. Typhimurium) e fljB (S. Typhimurium) respectivamente. O sistema de clonagem adotado possibilitou a producao de clones dos fragmentos geneticos da HSP60 e flagelina das cepas de Salmonella, permitindo a utilizacao posterior desses clones em ensaios de expressao genica, com potencial futuro de serem utilizados como imunoestimulante inespecifico das aves.