CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DO ALELO ASSOCIADO A AUSÊNCIA DE SEMENTES EM Vitis vinifera L.

Para investigar o controle genetico da ausencia de sementes Revers et al. (2010) analisaram a cultivar sem semente Vitis vinifera ‘Crimson Seedless’ detectando um QTL para a ausencia de sementes no cromossomo 18, onde encontra-se o locus SDI (Seed development inhibitor) . Estudos mostraram que a presenca de um alelo dominante na regiao do locus SDI e responsavel por 50 a 90% da variância fenotipica total de ausencia de sementes; nosso grupo identificou um gene candidato, o VvAGL11 , localizado neste locus . O marcador molecular microssatelite VMC7F2, localizado na regiao promotora do VvAGL11 , e altamente polimorfico e capaz de selecionar videiras sem sementes com 95% de eficiencia. O objetivo deste trabalho foi caracterizar as formas alelicas deste gene e sua associacao a ausencia de sementes em V. vinifera . Apos a extracao do DNA das cultivares Chardonnay (pirenica) e Sultanina (apirenica) e o emprego de tecnicas de PCR baseadas em polimerases de alta fidelidade, foi possivel realizar a amplificacao completa do gene com a utilizacao de seis pares de iniciadores especificos sobrepostos. Os produtos de PCR obtidos foram clonados em vetor pGEM-T Easy ® (Promega) para a separacao alelica com posterior extracao de DNA plasmidial. De 10 a 20 clones por fragmento foram sequenciados e posteriormente os alelos especificos para ambas as cultivares foram montados. Os dois alelos de VvAGL11 de ‘Chardonnay’ mostraram 99% de identidade com a sequencia correspondente ao genoma de videira (cultivar ‘Pinot Noir’, PN40024). Um dos alelos de VvAGL11 de ‘Sultanina’ tambem apresentou 99% de identidade com PN40024. Entretanto, o outro alelo de VvAGL11 de ‘Sultanina’ apresenta um grupo de polimorfismos que o diferencia dos outros, e foi denominado de alelo mutante de ‘Sultanina’ ( Su mut ). O conjunto de polimorfismos neste alelo foi composto por 28 INDELs e 105 SNPs . As principais alteracoes observadas em Su mut, foram dois SNPs que alteraram dois aminoacidos no momento da traducao (R590L e T628A). A empresa LGC Genomics desenvolveu nove marcas, baseadas nos SNPs e INDELs unicos encontrados no alelo Su mut, que serao utilizadas para a genotipagem de populacoes segregantes para apirenia por meio da tecnica de PCR competitiva alelo especifica (KASP ® ). O proximo passo e a validacao destas marcas em populacoes de videira segregantes para apirenia.