Validação de protocolo de extração de dna sem uso de nitrogênio líquido

Com o avanco das tecnicas de Biologia molecular, surge a necessidade de se aprimorar protocolos de extracao de DNA para que sejam mais rapidos e baratos, possibilitando a inclusao de novas metodologias que tendem a beneficiar seus usuarios. Nos protocolos de rotina, o uso do nitrogenio liquido e indispensavel para o rompimento da parede celular e retirada dos acidos nucleicos do interior das celulas durante o processo de maceracao. No entanto, sabe-se que o custo do nitrogenio liquido e bastante elevado. As furadeiras de bancada fazem a mesma funcao do nitrogenio liquido e sao extremamente baratas, duraveis e faceis de serem utilizadas e o seu uso em relacao ao nitrogenio e permite uma economia de R$20.000-R$30.000,00/ano a depender do numero de amostras quando se compara aos gastos em laboratorios ao final do ano. Portanto, o objetivo deste trabalho foi validar protocolo de extracao de DNA com o uso da furadeira de bancada na extracao de DNA das principais culturas da Embrapa Mandioca e Fruticultura. Apos a coleta do material vegetal, foram realizadas as extracoes de DNA das seguintes culturas: bananeira, abacaxi, citros, mamao, maracuja e mandioca. Para cada cultura foram utilizados tres genotipos, totalizando tres repeticoes cada. A quantificacao para verificar a quantidade e a qualidade do DNA foi feita em gel de agarose 1% por meio de eletroforese. Em seguida foram realizadas as amplificacoes com dez marcadores moleculares, sendo: cinco marcadores SSR (Simple Sequence Repeats) e cinco ISSR (Inter-simple Sequence Repeats), com o intuito de validar o protocolo. A extracao de acidos nucleicos com uso da furadeira de bancada foi idealizada no CIRAD – Baillarguet em Montpellier – Franca e CIP-Lima Peru. O metodo de extracao de DNA com auxilio da furadeira de bancada foi eficiente na obtencao de DNA de qualidade em comparacao com o metodo tradicional que faz uso do nitrogenio liquido e sua validacao foi confirmada por meio das amplificacoes via marcadores ISSR e SSR. A nova metodologia ira contribuir para a reducao de custos nos laboratorios de Biologia Molecular, principalmente em epocas de recursos escassos para a pesquisa.