Construction of adeno-associated virus vector containing human papilloma virus 16 E7 gene and its expression in eukaryotic cells

目的 构建含人乳头状瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,并验证HPV16E7 mRNA和蛋白在真核细胞中的表达.方法将含腺相关病毒(AAV)末端反向重复序列及HPV16E7基因的重组质粒pAAV-MCS-E7、含rep/cap基因的质粒pAAV-RC及辅助质粒pAAV-helper共同转染胚胎肾细胞系HEK293细胞,回收、纯化病毒颗粒并鉴定,斑点杂交法测定病毒滴度, RT-PCR技术、蛋白印迹法验证HPV16E7 mRNA和蛋白在真核细胞中的表达.结果电镜鉴定结果显示真核细胞中有病毒颗粒存在,斑点杂交法测定病毒滴度为1×1011/ml.含HPV16E7基因的rAAV载体转染真核细胞后, 在细胞内可检测到HPV16E7 mRNA和蛋白的表达.结论本实验成功构建了含HPV16E7基因的rAAV载体,经验证HPV16E7 mRNA和蛋白在真核细胞内有表达。