Alelotipificación en cáncer de testículo

Los marcadores tumorales existentes (alfafetoproteina y gonadotrofina corionica humana) son patrones indirectos y no estan expresados en todos los tumores testiculares (TT) por lo que no permiten una confiabilidad absoluta. Por esto, creemos que la identificacion de los genes involucrados en la iniciacion y progresion de TT es importante. El estudio del genoma humano (GH) ha ayudado a la identificacion de la mayoria de los genes supresores (GS) de tumores descubiertos (p53,VHL,APC,CDKN2,RB). Para lograr detectarlos, se identifican las regiones cromosomales con alta frecuencia de deleciones (AFD) y mediante su estudio sistematico se puede identificar si existen GS involucrados. El objetivo de este trabajo es el estudio del GH(alelotipificacion) mediante la amplificacion por PCR de secuencias de bases repetidas polimorfas, que se encuentran distribuidas a lo largo del GH. Se seleccionaron 50 casos de TT del tipo seminoma puro y se microdiseco DNA de tejido tumoral y normal en TT. Este material fue amplificado mediante PCR, posteriormente se amplificaron mediante primers conocidos, secuencias cromosomicas determinadas de los sitios cromosomales con altas frecuencias de LOH y MSI buscando zonas calientes. Despues de identificadas las regiones hot del mapa cromosomico, se acoto el estudio a los cromosomas 5 y 12. Se utilizaron 12 marcadores, para franquear zonas especificas del 5 y 12, donde encontramos previamente la mayor frecuencia de LOH. Un completo estudio de alelotipificacion de alta densidad en los diferentes tipos histologicos de TT permitio detectar una AFD y LOH en cromosomas 12 y 5, detectandose que 47 de 50 casos de seminoma presentan algun marcador con inestabilidad genetica en estas zonas, un 78 por ciento de los tumores estudiados (38/50) presentan mas de 3 marcadores con inestabilidad. Al franquear las regiones especificas, la frecuencia de inestabilidad (FI) aumenta significativamente en el brazo p de ambos cromosomas. A la luz de los resultados concluimos que existe una FI significativamente alta en los cromosomas 5 y 12, lo que sugiere que en alguna region cercana del brazo corto de estos, se puede encontrar algun GS. Este gen se encontraria posiblemente inactivo, dado que la FI aumenta al cercar el area, lo que hace pensar en un rol supresor. Este es el primer estudio que logra identificar las zonas de inestabilidad cromosomal mas frecuentes del TT y ahora realizaremos el estudio de baja densidad con la intencion de encontrar este gen. (AU)