Diagnostický a terapeutický potenciál membránového Hsp90

Východiska:  Heat shock protein 90 (Hsp90) je molekularny chaperone, ktorý pomaha bunke udržiavať proteinovu homeostazu cez modulaciu stability de novo syntetizovaných proteinov. Zvýsena expresia Hsp90 je charakteristicka pre nadorove bunky s vysokými metabolickými narokmi, ktore si vytvorili “zavislosť” na chaperonovom systeme. Specificka inhibicia Hsp90 ma preto sľubný terapeutický potencial a niekoľko inhibitorov Hsp90 sa už nachadza aj v klinických skuskach. Nedavno bola okrem cytoplazmatickej lokalizacie popisana aj pritomnosť Hsp90 na membrane nadorových buniek, pricom extracelularne lokalizovaný Hsp90 bol u nadorov implikovaný pri zvýsenej invazivite a metastazovani. Pochopenie vzťahu cytoplazmatickej a na membrane exponovanej formy Hsp90 može mať vďaka jeho prirodzene vyssej hladine v nadorových bunkach význam pri skorej detekcii malignity ako aj prispieť k pochopeniu mechanizmu importu terapeutik cielených na Hsp90 do buniek. Preto sme na modeli bunkových linii karcinomu prsnika skumali zavislosť importu fluorescencne znaceneho inhibitora Hsp90 od hladiny jej membranovej formy a celkovej expresie Hsp90. Metody: Prietokova cytometria bola použita na stanovenie importu FITC-Geldanamycin do buniek a hladiny extracelularnej Hsp90, celkova expresia Hsp90 bola stanovena pomocou SDS-PAGE a Western blottingu. Ziskane data boli podrobene statistickej analýze možnej korelacie. Výsledky: Na vybraných bunkových liniach karcinomu prsnika (BT-474, BT-549, BT-20, MCF-7, MDA-MB-468, SK-BR-3 a T-47D) sme analyzovali celkovu hladinu Hsp90 a mieru jej expozicie na bunkovej membrane a pomocou prietokovej cytometrie sme urcili mieru importu fluorescencne znaceneho inhibitora Hsp90. Ziskane data nam po statistickej analýze odhalili korelaciu medzi hladinou celkoveho a membranoveho Hsp90 a takisto importom fluorescencne znaceneho inhibitora Hsp90 FITC-Geldanamycin. Zaver: Z nasich výsledkov vyplýva, že import inhibitorov Hsp90 je pravdepodobne zavislý od hladiny membranovej formy Hsp90 ako aj jej celkovej expresie a može tak odražať zavislosť nadorových buniek na chaperone Hsp90.