Isolation and culture of rat pancreatic stellate cells

目的建立大鼠胰星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)的分离培养方法.方法大鼠胰腺组织经胶原酶和链霉蛋白酶E消化后,用Nycodenz不连续密度梯度离心法分离PSC,在328 nm紫外光激发下观察细胞的自发荧光现象,并以免疫组化技术检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达,同时观察培养细胞的形态和生长特性.结果新鲜分离的大鼠PSCs产率、活力和纯度分别约为2.5×106/g胰腺、95%和90%.培养的PSCs可自发活化,表达α-SMA,细胞由静止型转化为肌成纤维样细胞表型.原代培养10天后细胞纯度＞95%,传代培养后细胞纯度可达99%以上.结论利用Nycodenz密度梯度离心方法可成功分离大鼠PSCs,其细胞产率、活力和纯度均可满足体外研究需要.