Analyse fonctionnelle du regulateur de transcription cyp1 implique dans la regulation par l'oxygene chez la levure saccharmyces cerevisiae

Chez s. Cerevisiae, cyp1 est un activateur transcriptionnel implique dans le controle de l'expression de genes dont la regulation est oxygene dependante via l'effecteur heme. La production de sa region n-terminale (residus 1 a 247) chez la bacterie e. Coli a conduit a l'obtention d'anticorps. Leur utilisation a permis de detecter chez la levure, la proteine cyp1 surproduite en mettant le gene qui la code sous le controle d'un promoteur conditionnel hybride gal10-cyc1, d'une part dans un vecteur multicopie, d'autre part au locus chromosomique. Ces surproductions ont permis de mettre en evidence l'existence d'un facteur cellulaire x associe a la proteine cyp1 en absence d'heme. La region de la proteine cyp1 qui joue un role dans cette interaction a ete identifiee: elle contient une repetition imparfaite de sept fois le motif kcpvdh. L'ensemble des etudes in vitro et in vivo de la proteine cyp1 a conduit a la conclusion que c'est l'activite transcriptionnelle de cette proteine qui est heme dependante et non son interaction avec l'adn. La proteine codee par un mutant allelique du gene cyp1, le mutant cyp1-18 dont, le phenotype est caracterise par la croissance sur lactate et la surproduction d'iso-2-cytochrome c de souches cycl-1, a ete egalement surproduite chez la levure s. Cerevisiae le controle du promoteur hybride galio-cyc1. Cette proteine montre un comportement dependant de l'heme similaire a celui de la proteine cyp1. Une dissection fonctionnelle de la proteine cyp1-18 met en evidence une interaction entre sa partie n-terminale (residus 1-247) et l'appareil de transcription. Enfin des etudes structurales de la proteine cyp1 suggerent qu'elle se fixe sur ses sequences cibles sous la forme d'un dimere.