Cultivo de celulas de Drosophila melanogaster em diferentes formulações de meios de cultura livres de soro visando a produção da glicoproteina do virus da raiva

Celulas de inseto tem sido frequentemente empregadas na obtencao de proteinas recombinantes devido a algumas vantagens em relacao as celulas de mamiferos, e a linhagem Drosophila melanogaster Schneider 2 e um dos sistemas de expressao utilizados para este proposito. Entretanto, a literatura e escassa em relacao ao metabolismo e ao cultivo destas celulas, o que motivou o desenvolvimento deste trabalho. O objetivo deste estudo foi determinar, atraves da tecnica estatistica de planejamento fatorial de experimentos, um meio de cultura adequado ao crescimento da linhagem Drosophila melanogaster Schneider 2 transfectada para expressao da glicoproteina do virus da raiva (GPV) e avaliar seu comportamento nos diferentes meios formulados. Para tal, no meio basal TC100, foram estudados os efeitos dos suplementos glicose, glutamina, concentrado proteico de soro de leite, yeastolate (extrato de levedura), hidrolisado de soja, lactoalbumina hidrolisada, emulsao lipidica e Pluronic F68 sobre o crescimento e a viabilidade celular, na tentativa de reduzir o percentual de soro fetal bovino do meio de cultura. A combinacao de diferentes suplementos permitiu que o soro fetal bovino fosse eliminado do meio de cultura, principalmente em decorrencia da adicao de yeastolate, e, em varias das formulacoes desenvolvidas, a densidade de celulas foi bastante superior aquela obtida empregando o meio basal TC100 suplementado com 10% de soro fetal bovino. O meio de cultura que resultou no melhor desempenho celular foi formulado com o meio TC100 suplementado com 10 g/L de glicose e 3,5 g/L de glutamina (concentracoes finais), 3 g/L de yeastolate, 1% (v/v) de emulsao lipidica e 0,1 % (m/v) de Pluronic F68. Inicialmente, os ensaios realizados em biorreator nao reproduziram o crescimento celular obtido em menor escala. Porem, com o aumento da concentracao de Pluronic F68 para 0,6%, tal limitacao foi contornada. Glicose nao foi o substrato limitante nos meios formulados e lactato foi produzido em pequenas quantidades. Apesar de produzido em elevadas concentracoes, o amonio nao influenciou o crescimento celular. A dosagem da glicoproteina mostrou que as celulas nao perderam sua capacidade de expressao apos a adaptacao em diferentes meios de cultura e que a producao de GPV no meio formulado e superior a verificada com os meios comerciais SF900 II e TC100 suplementado com 10% de soro fetal bovino Abstract