Rôle de Dok-1 dans l'activation et le développement des lymphocytes T

Dok-1 est un des deux membres de la famille Dok (Downstream of kinase) exprimes dans les lymphocytes T. Cette proteine est phosphorylee sur tyrosine lorsque la cellule est stimulee par les recepteurs de co-stimulation CD28 ou CD2 mais non par le complexe TCR/CD3. Il a ete demontre que Dok-1 est un regulateur negatif specifique des voies de signalisation initiees par CD2. Son association avec RasGAP est un des mecanismes proposes pour expliquer son activite inhibitrice sur la voie des MAP kinases ERK.1/2. La fonction de Dok-1 dans la regulation de la voie CD28 est encore inconnue. Nous avons tout d'abord caracterise l'expression et la regulation de sa phosphorylation dans les lymphocytes matures et immatures chez la souris. Nous montrons que cette proteine est exprimee des le stade le plus immature des thymocytes. Son expression demeure constante tout au long du developpement des thymocytes. Afin de mieux caracteriser le role de Dok-1 dans la regulation de l'activation des lymphocytes T, nous avons genere des souris transgeniques qui surexpriment differents niveaux de Dok-1. L'expression du transgene est controlee par le promoteur hCD2, ce qui permet une expression des le stade DN2 dans les thymocytes et chez les lymphocytes matures. Nous demontrons que la surexpression de Dok-1 affecte le developpement des thymocytes, plus specifiquement la transition du stade DN a DP. Le nombre de thymocytes totaux est diminue de 10 a 15 fois en fonction du niveau de surexpression du transgene. Comme attendu, le nombre de lymphocytes presents dans la rate est aussi diminue. Nous observons egalement une diminution du rapport CD4+/CD8+ tant au niveau du thymus que de la rate. Ces resultats suggerent que Dok-1 pourrait jouer un role de regulateur negatif de la signalisation initiee par le pre­ TCR mais aussi lors de la selection et/ou de la survie des lymphocytes T CD8+. Par contre, la signalisation initiee par le TCR des thymocytes au stade DP semble normale. En effet, la regulation a la hausse des marqueurs d'activation CDS et CD69 suite a une stimulation par le TCR n'est pas affectee. De plus, le niveau d'expression du complexe TCR/CD3 dans les thymocytes DP et SP et chez les lymphocytes peripheriques est normal. Nous avons analyse l'effet fonctionnel de Dok-1 sur la proliferation des lymphocytes T et sur la secretion de cytokines induite suite a une stimulation par le TCR. Alors que la proliferation des lymphocytes T CD4+ ou CDS+ n'est pas affectee par la surexpression de Dok-1, la secretion de cytokines est grandement influencee. En effet, nous montrons que les lymphocytes T CD4+, suite a une stimulation par le TCR, produisent moins d'IL-2 mais beaucoup plus d'IFN-y. La production d'IL-4 ne semble pas affectee sauf lors d'une stimulation des cellules par une combinaison de PMA et d 'ionomycine ou elle est augmentee. Les cellules T des souris transgeniques ont un phenotype de cellules memoires puisqu 'elles expriment davantage le marqueur CD44 de facon dependante du niveau de surexpression de Dok-1. Par contre, les marqueurs, CD69 et CD25, qui sont regules a la hausse precocement suite a la stimulation des cellules, sont exprimes normalement. Enfin, nous montrons que les defauts observes chez nos souris transgeniques, tant au niveau des fonctions que de la maturation des lymphocytes T, ne semblent pas etre attribuable a une diminution de l'activation de la voie des MAP kinase ERK.1/2. En conclusion, nos resultats indiquent que Dok-1 pourrait jouer un role tant au niveau de la signalisation initiee par le pre-TCR que celle initiee par le TCR dans les lymphocytes immatures et matures. La caracterisation des interactions moleculaires mises en jeu par Dok-1 pourrait permettre une meilleure comprehension des mecanismes qui controlent la maturation et l'activation des lymphocytes T.