OPTIMIZACIÓN DE LA TRANSFORMACIÓN GENÉTICA CON Agrobacterium rhizogenes 1

Para optimizar la eficiencia en la transformacion genetica con Agrobacterium rhizogenes, secciones de zanahoria fueron inoculadas con la cepa de Agrobacterium A4TC y co-cultivadas con acetosiringona, floroglucinol y una combinacion de ambos. La acetosiringona es uno de los compuestos fenolicos que liberan los tejidos vegetales como respuesta a heridas, el cual induce la transferencia del T-ADN de la agrobacteria a la planta. El floroglucinol es tambien un compuesto fenolico; sin embargo, ejerce un efecto sinergistico con las auxinas, inhibiendo parcialmente la actividad de las citocininas. La mayor eficiencia en la transformacion (75%) se obtuvo con el uso de acetosiringona (100 mM) en combinacion con floroglucinol (25 mg l-1). En general, 6 dias de co-cultivo, independientemente de los tratamientos, fue el tiempo que indujo el mayor porcentaje de transformacion. La inclusion de 100 mg l-1 de kanamicina resulto un mecanismo eficiente para discriminar entre raices transformadas y no transformadas. En adicion, este trabajo presenta un novedoso sistema con el cual, una vez realizada la transformacion, la bacteria puede ser eliminada completamente en 48 h con Cefotaxime en dosis de 500 mg l-1. ABSTRACT