Babesia bigemina Kayseri/Türkiye suşunun in vivo ve in vitro izolatlarında apikal membran antijen-1 proteininin moleküler karakterizasyonu ve ekspresyonu

Bu calisma, “Babesia bigemina Kayseri/Turkiye” susundan in vivo ve in vitro kultivasyon yapilarak ve pasajlanarak elde edilmis olan izolatlarin AMA-1 proteinlerinin molekuler karakterizasyonu ve ekspresyonu ile soz konusu proteinin attenuasyona bagli polimorfizm gosterip gostermedigini ortaya koymak amaciyla yapilmistir. Bu amacla, Babesia bigemina Kayseri/Turkiye susuna ait, in vivo ve in vitro izolatlardan genomik DNA ve total RNA izolasyonu sonrasinda hedef gen, PCR ile butun olarak amplifiye edilmis ve purifiye amplikonlar uygun vektorlere klonlanmistir. Klonlama sonrasinda rekombinant plazmidler, sekanslanarak izolatlara ait nukleotid dizilimleri GenBank’a kaydedilmistir . Nukleotid ve amino asit sekanslarin coklu ve ikili hizalama analizleri yapilmis ve izolatlarin filogenileri arastirilmistir. Elde edilen rekombinant plazmidler, E. coli BL21 (DE3) hucrelerine transforme edilerek IPTG ile induklenmis ve ekspresyonlari saglanmistir. Ekspresyon urunlerinde hedef proteinler SDS-PAGE ve Western Blot teknikleri ile analiz edilmistir. Kayseri/Turkey IV1 ve Kayseri/Turkey IT2 izolatlari nukleotid dizilimlerinin kendi aralarinda %99.7 identiklik gosterdigi ve 103. nukleotiddeki mutasyona bagli olarak amino asit diziliminde farklilik (%0.2) olustugu belirlenmistir. SDSPAGE ve Western Blot analizleri sonucu soz konusu iki izolata ait AMA-1 proteinlerinin 72 kDa molekuler agirliklarla farkli IPTG konsantrasyon duzeyleri ve zaman araliklarinda eksprese olduklari belirlenmistir. Sonuc olarak bu calisma ile Babesia bigemina Kayseri/Turkiye susunun in vivo ve in vitro pasajlarindan elde edilmis iki izolata ait AMA-1 nukleotid ve amino asit dizilimleri arasinda mutasyonel farkliliklari gosteren attenuasyona bagli polimorfik alanlar oldugu ortaya konulmustur