CRISPR/Cas9技术敲除 faf 1基因对斑马鱼软骨及肌节发育的影响

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼 faf 1基因，并研究 faf 1基因对斑马鱼发育的影响。 方法针对斑马鱼 faf 1基因设计并制备gRNA，通过显微注射技术将gRNA与Cas9 mRNA混合注入斑马鱼单细胞胚胎中，通过酶切和基因测序技术筛选出发生突变的F0代斑马鱼，将其与野生型斑马鱼外交得到F1代杂合体斑马鱼，检测其可遗传突变类型，并用显微镜观察、记录每一代斑马鱼表型。 结果成功制备了 faf 1 gRNA和Cas9 mRNA。位于 faf 1 6号外显子的gRNA(gRNA6) 能使 faf 1基因发生移码突变。筛选出可遗传突变类型（mutant 1，MU1）并观察到该杂合突变型斑马鱼有体细胞色素沉积延迟，受精后第4天开始尾部肌节出现“结节样”表型以及头颅缩小、舌骨小角角度增大等颅面软骨畸形的变化，并于受精后8~9 d死亡。 结论利用CRISPR/Cas9敲除该基因产生了新的表型，即色素沉积延迟及尾部肌节部位出现“结节样”变化。