Recuperação e purificação de β-galactosidase de Kluyveromyces lactis utilizando cromatografia de modo misto

As mais importantes lactases, em termos de interesse biotecnologico, sao aquelas produzidas por leveduras do genero Kluyveromyces, que sao intracelulares e, em sua maioria, sao obtidas por fermentacao em cultura submersa. Esta tecnica, assim como a maioria dos processos biotecnologicos, envolve a necessidade de purificacao de proteinas e peptideos a partir de uma variedade de fontes. Neste contexto, uma das tecnicas mais notavelmente promissoras e a cromatografia de modo misto, que permite interacoes ionicas e hidrofobicas simultaneamente entre o adsorvente e o adsorbato. O objetivo do presente trabalho foi estudar a viabilidade da recuperacao e purificacao da enzima β-galactosidase, produzida por meio de processo fermentativo e utilizando o micro-organismo Kluyveromyces lactis, por tecnica de cromatografia de modo misto. Operacoes unitarias de precipitacao proteica e dialise foram tambem realizadas com o intuito de concentrar a enzima de interesse e eliminar detritos celulares e outros interferentes advindos do meio de fermentacao, o que ocasionaria uma diminuicao do rendimento do processo. A producao se apresentou satisfatoria, com uma media de valores de concentracao de enzimas totais de 0,45 mg/mL, atividade enzimatica de 67 U/mL, atividade especifica de 167,9 U/mg. O Fator de Purificacao obtido foi de 1,17. Uma precipitacao seguida de dialise foi realizada e a posterior corrida cromatografica em leito fixo com esse material rendeu valores de recuperacao de 41,0 e 48,2% de proteina total e atividade total, respectivamente. A analise de eletroforese SDS-PAGE confirmou a evolucao do processo de purificacao no decorrer das operacoes unitarias, atestando a viabilidade do emprego das tecnicas utilizadas para obtencao de enzimas com consideravel grau de pureza com alto valor comercial agregado.