Cre／lox介导剔除转双价抗虫sck＋cryIAc基因籼稻恢复系明恢86材料的选择标记基因

Cre／lox系统通过其Cre重组酶对lox序列进行切割和重新连接，介导lox序列发生特异性重组。利用重组报告基冈系统Pactin-lox-hpt-lox-gusA，对Cre／lox系统在水稻(Oryza saliva L．)中介导转基因的剔除进行了研究。Pactin-lox-hpt-lox-gusA系统中选择标记hpt基因侧翼含两个同向lox位点，并位于水稻actinl启动子和gusA基因之间。当hpt在Cre酶作用下被剔除时，actinl启动子可以和gusA基因融合在一起从而驱动GUS表达。通过农杆菌介导获得了分别转cre基因、Pactin—lox—hpt—lox—gusA结构和双价抗虫基因lox—hpt—lox—sck-cryIAc结构的水稻。利用有性杂交方法将cre基因导人列转化lox结构的植株中。在4个转Pactin—lox—hpt—lox-gusA T0植株×转cre T0植株所配组合的30个杂交F1植株中，12个植株表达GUS活性，9个表现潮霉素敏感，表明hpt基因被剔除。研究进一步通过Cre／lox介导剔除转双价抗虫sck+cryIAc基冈籼稻恢复系明恢86材料基冈组中的选择标记hpt基因。在9个转lox-hpt-lox-sck-cryIAc T2代纯合植株×转cre T2代纯合植株所配组合的77个杂交F1植株中，56个植株表现潮霉素敏感。分子分析证实在这些对潮霉素敏感的植株中hpt基因已经被剔除。