重组腺病毒体外诱导山羊骨髓问充质干细胞成骨分化的研究

目的 探讨腺病毒介导骨形态发生蛋白2（BMtr2）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）双基因体外转染山羊骨髓间充质干细胞（BMSCs）后目的基因表达与诱导成骨情况。方法从2岁健康雌性山羊髂骨处骨穿抽取骨髓2ml，利用密度梯度离心法分离培养山羊BMSCs，将前期构建好的腺病毒载体Ad—BMP2一bFGF、Ad—BMP2分2组，以MOI=5000分别转染BMSCs，每2d用ELISA法检测BMP2和bFGF的表达情况，每周用ALP染色试剂盒及定量试剂盒检测ALP表达情况。结果Ad—BMP2-bFGF转染BMSCs48h后，目的蛋白已有显著表达（BMP2为3996．22pg／ml、bFGF为1352．15pg／m1），第6天达到高峰（BMP2为5146．63Pg／ml、bFGF为1434．75Pg／m1），与未转染组比较差异有统计学意义（P〈0．05），3周后细胞呈现明显的成骨改变,All。P活性明显增高（266mol／L），Ad—BMP2-bFGF组ALP表达量约为Ad—BMP2组的1．5倍（P〈0．05）。结论经Ad—BMP2-bFGF转染的BMSCs具有持续高水平目的蛋白表达活性，转染后的BMSCs表现出明显的成骨活性．成骨活性明显强于Ad—BMP2组。