Fluorescenčně aktivovaná separace buněk – optimální technikapro získání dostatečného počtu plazmatických buněk promolekulárně cytogenetické vyšetření chromozomových abnormalit uosob s monoklonální gamapatií nejasného významu

Monoklonalni gamapatie nejasneho významu (MGUS) je prekanceroza spojena s trvale vyssim rizikem vzniku nadorove choroby, nejcastěji mnohocetneho myelomu. Již ve stadiu MGUS se v plazmatických buňkach (PCs) nalezaji specificke chromozomove aberace. Molekularně cytogeneticka vysetřeni osob s MGUS jsou vsak znacně komplikovana nizkou infiltraci kostni dřeně PCs. Cilem nasi prace byla optimalizace ziskani ci odliseni PCs v kostni dřeni pro molekularně cytogeneticka vysetřeni chromozomových abnormalit u osob s MGUS. Celkově bylo analyzovano 103 vzorků kostnich dřeni od 98 osob s MGUS. Postupně byly vyzkouseny tři strategie odliseni ci separace PCs. Celkem 10 vzorků bylo vysetřeno pomoci fluorescencni imunofenotypizace a nasledne interfazni fluorescencni in situ hybridizace (I-FISH). Z důvodu nizkeho poctu PCs se vsak podařilo vysetřit pouze 20 % (2/10) vzorků. Pomoci magneticky aktivovane separace (MACS) bylo ziskano 29 vzorků. Pomoci nasledne I FISH se na takto separovaných buňkach podařilo vysetřeni u 45 % (13/29) vzorků. Zbylých 16 vzorků nebylo možne vysetřit z důvodu nizke cistoty. Technikou fluorescencně aktivovane separace (FACS) bylo separovano celkem 64 vzorků, z toho uspěsně vysetřených vzorků bylo 98% (63/64). Technikou I-FISH bylo zhodnoceno celkem 67 jedinců. Del(13)(q14) byla nalezena u 19 % (12/62), del(17)(p13) u 2 % (1/63), přestavba genu IGH u 70 % (32/46), 1q21 u 17 % (9/53) a hyperdiploidie u 11 % (6/55) osob. Bylo ukazano, že až využiti separace pomoci FACS umožňuje uspěsnou I-FISH analýzu PCs u jedinců s prekancerozou MGUS.