喉癌细胞CD44^＋CD133^＋高致瘤亚群的生物学特性

目的筛选喉癌细胞中的高致瘤亚群，探讨其作为肿瘤干细胞的生物学特性。方法原代培养喉癌细胞，采用流式细胞仪分选CIM4^＋、CD133^＋、CD44^＋CD133^＋、CD44^＋CD133^-细胞，并分别以1×10^6、1×10^5、1×10^4、1×10^3个／只接种于裸小鼠左腋皮下，观察各亚群成瘤时间、成瘤率、平均瘤重及肿瘤体积，筛选出在极低细胞浓度下的高致瘤亚群。采用Boyden小室体外侵袭实验，检测各亚群细胞的侵袭能力。采用免疫细胞化学染色检测各亚群细胞中干细胞抗原-1（SCA-1）及整合素β1的表达。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot法，检测各亚群细胞中Bmi-1基因的表达。结果CIM4^＋CD133^＋细胞以1×10^3个／只接种于裸小鼠，可以成瘤。当各亚群细胞以1×10^6个／只接种于裸小鼠4周后，CD44^＋CD133^＋细胞接种组裸小鼠的肿瘤体积和重量分别为（7726．81±196．93）mm^3和（5．51±0．12）g，均大于CIM^＋、CD44^＋CD133^-及未分选细胞接种组（均P〈0．05），而与CD133^＋细胞接种组裸小鼠的肿瘤体积和重量差异无统计学意义（P〉0．05）。CD44^＋ CD133^＋细胞24h的侵袭细胞数为83．62±1．61，显著高于其他各亚群喉癌细胞。CD44^＋CD133^＋细胞高表达整合素β1和SCA-1。Bmi-1mRNA在CD44^＋CD133^＋细胞中的表达水平为0．951±0．112，显著高于CD44^＋CD133^-细胞和未分选的喉癌细胞（0．532±0．214和0．268±0．193，均P〈0．01）；Bmi-1蛋白在CD133^＋和CIM4^＋CD133^＋细胞中高表达，而在CD44^＋、CIM4^＋CD133^-和未分选的喉癌细胞中仅有少量表达。结论CD44^＋CD133^＋喉癌细胞具有高致瘤性及肿瘤干细胞的生物学特性，可能是喉癌恶性增殖的根源，并有望成为喉癌治疗的新靶点。