Estudo do potencial citotóxico de novos ésteres sintéticos derivados da mistura triterpenoidica α-/β-amirina em modelos experimentais in vitro

Triterpenoides sao compostos que nos ultimos anos tem despertados grande interesse em razao de sua diversidade estrutural e da descoberta de um amplo espectro de atividades farmacologicas. O presente estudo avaliou o potencial citotoxico de quatro derivados de uma mistura de α-,β-amirina em linhagens tumorais humanas. Dentre estes, apenas o composto 3-O-Carboximaleinato de α-, β-amirina (3a/3b) foi ativo, especialmente na linhagem leucemica HL-60, com valores de IC50 variando entre 1,8 e 3,0 µM. Este derivado foi avaliado, tambem frente a outra linhagem leucemica, K562, com IC50 variando entre 1,76 e 2,96 µM, sugerindo uma especificidade desta substância para leucemias. E sua especificidade para celulas tumorais foi confirmada em ensaios de citotoxicidade em celulas nao transformadas, sendo testada em uma linhagem de macrofagos, J774 (IC50 entre 3,10 e 3,60 µM) e em celulas mononucleares do sangue periferico humano (CMSPH), cuja proliferacao nao foi impedida e nao houve dano ao DNA destas celulas. Nenhum dos compostos mostrou atividade hemolitica contra eritrocitos de camundongos (EC50 > 200 µg/mL), o que sugere uma citotoxicidade por mecanismos de acao mais especificos. Desta forma, a fim de determinar o mecanismo de acao envolvido, uma sequencia de experimentos in vitro foram realizados na linhagem HL-60. As celulas foram tratadas em diferentes concentracoes da amostra 3a/3b (1,5, 3,0 e 6,0 µM) por 24h. A viabilidade das celulas HL-60 (teste azul de tripan e citometria de fluxo) foi reduzida nas concentracoes de 3,0 e 6,0 µM, apos o tratamento. A analise morfologica das alteracoes celulares realizada por metodos de coloracao (May-Grunwald-Giemsa e laranja de acridina/brometo de etidio (LA/BE)) e por citometria de fluxo (integridade de membrana) revelaram caracteristicas tipicas de celulas apoptoticas (membrana integra, reducao do volume celular, nucleo picnotico e cromatolise), tambem nas concentracoes de 3,0 e 6,0 µM. Outros testes por citometria de fluxo revelaram que houve externalizacao da fosfatidilserina, que nao houve formacao de especies reativas de oxigenio (EROS) e que a molecula 3a/3b induziu apenas a via extrinseca da apoptose, pela ativacao da caspase iniciadora 8 e a consequente ativacao das caspases efetoras 3 e 7. Estes dados indicam um mecanismo citotoxico por inducao de uma via apoptotica, envolvendo receptores de morte. Por conseguinte, estes resultados apontam o potencial citotoxico do analogo 3a/3b.