古细菌Pyrococcus furiosus高嗜热α—淀粉酶基因在大肠杆菌中的分泌表达

该文将大肠杆菌表达载体pKK223-3中含tac启动子的片段以BamHI、EcoRI酶切后接入表达载体pET28a中,构建成新的表达载体pEtac,通过PCR扩增获得P.furiosus胞外α-淀粉酶完整结构基因,接入pEtac中,转化大肠杆菌JM109.在IPTG诱导下,转化子周质中能测出明显酶活,证明Pyrococcus furiosus的胞外α-淀粉酶能在自身信号肽引导下分泌到大肠杆菌细胞周质中.重组酶最适pH为4.5,最适温度为95℃,重组酶经121℃保温1h,酶活仍能保持50%以上,性质与由P.furiosus自身分泌的胞外α-淀粉酶相似.