Caractérisation de peptides lasso par EPD et EDD

Les peptides lasso sont des peptides bioactifs d'origine bacterienne. L'extremite C-terminale de ces peptides est enchâssee dans un cycle macrolactame forme entre le residu N-terminal et le carboxylate de la chaine laterale d'un residu glutamate ou aspartate en position 8 ou 9. La maturation d'un precurseur lineaire sous l'action de deux enzymes permet d'obtenir cette structure compacte et rigide. Notre travail consiste a caracteriser par spectrometrie de masse la topologie de ces peptides en forme de lasso. Leur fragmentation est comparee a celle de peptides synthetiques possedant une topologie differente avec le meme enchainement d'acides amines: peptide lactame non-lasso ou peptide lineaire. La microcine J25 (MccJ25), peptide lasso antibacterien produit par Escherichia coli AY25 [1], a d'abord ete etudiee par spectrometrie de masse en mode positif (CID, IRMPD et ECD) [2]. Dans cet expose nous presenterons les resultats obtenus sur cette molecule en mode negatif par activation vibrationnelle (CID) et electronique (EDD, EPD). Les experiences EPD (Electron Photodetachment Dissociation) ont ete realisees sur un LTQ modifie equipe d'un laser a 266 nm [3], tandis que les experiences EDD (Electron Detachment Dissociation) ont ete realisees sur un FTICR [2] avec des electrons d'environ 20 eV. La MccJ25 contient deux tyrosines capables d'absorber l'UV a 266 nm, induisant le detachement d'electron a l'origine des fragmentations observees en EPD. Afin de preciser le role de chaque tyrosine en EPD, nous avons etudie deux variants de MccJ25 produits par mutagenese dirigee, dans lesquels chaque tyrosine est selectivement substituee par une phenylalanine. Par ailleurs des experiences de double-resonance ont ete realisees en EDD sur le FT-ICR en faisant varier l'amplitude d'ejection de l'ion de charge reduite au cours de l'irradiation par les electrons [4]. Ces experiences fournissent des informations sur la cinetique de formation des fragments et nous ont permis de differencier plusieurs mecanismes de fragmentation.