Cigarette smoking coacervate up-regulates the expression of γ-glutamylcysteine synthetase in alveolar epithelial cells mediated by activator protein-1

目的 探讨香烟烟雾凝集物(CSC)对肺泡上皮细胞(CCL149)表达限速酶r-GCS的影响与机制.方法用不同浓度的CSC处理CCL149细胞1、4、8、12、24、48 h后, 采用反向聚合酶链反应和West 印记法在CSC作用不同时间点检测CCL149细胞表达r-GCS的mRNA和蛋白的水平;脂质体转染及荧光素酶活性检测法测定CSC对大鼠gamma-GCS重链(GCLC)基因5′-端启动子区域功能的影响;用EMSA法测定AP-1探针的结合水平.结果 CSC可刺激CCL-149细胞表达gamma-GCS,在一定浓度时(>1 μg/ml),CCL149细胞用CSC处理后1、4、8 h组γ-GCS mRNA的表达水平未见到有明显的差别;而12、24、48 h组γ-GCS mRNA的表达水平较对照组明显增高(1.71±0.12 vs. 0.67±0.06, P<0.05).CSC亦能使带有GCLC 5′-端全长的荧光素酶报道基因的荧光素酶的活性增强,与无启动子的空载体对照组比较,CSC刺激后12、24、48 h组荧光素酶的活性均明显增强,其γ-GCS的活性均有升高(0.63±0.24 vs. 1.75±0.27,P<0.05).CSC尚促进AP-1与GCLC的DNA结合水平.结论 CSC通过激活氧化应激敏感的转录因子AP-1上调CCL-149细胞内r-GCS的表达。