CX26／CX32缝隙连接蛋白的Tet—onHeLa细胞模型的建立及鉴定

目的体外建立一种特异性快速有效观察药物对细胞缝隙连接（GJ）作用的特异性细胞模型，为发现作用于GJ的药物以及GJ的特异性研究提供一种有力的技术手段。方法构建同时双向表达2种不同连接蛋白（CXs）的质粒；用表达CX26／CX32的质粒转染Tet．onHeLa细胞，建立稳定表达CX26／CX32并形成异质性GJ的HeLa细胞模型。设置多西环素（Dox）（μg／mL）处理组和未处理组，分别用RT—PCR和Westernblot法检测细胞CX26mRNA和蛋白质表达；细胞接种荧光示踪法检测细胞GJ功能；丽丝胺罗丹明B（SRB）法检测细胞的增殖。在上述细胞模型上，用GJ抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸（2-APB）和GJ激活剂维甲酸（RA）干预。结果HeLa细胞无内源性CX的表达，Dox可诱导Tet-onHeLa细胞CX26mRNA和蛋白质表达，并且被诱导表达的CX可形成有效的GJ。2-APB（50μmol／L）减少稳定表达CX26／CX32的HeLa细胞间的荧光传递数目，GJ抑制率为51．3％（P〈0．01）；RA（10I,Lmol／L）增多细胞问的荧光传递数目，GJ增强率为60．3％（P〈0．01）。结论成功建立Dox调控的、稳定表达CX26／CX32的Tet—OilHeLa细胞模型，为寻找可调节GJ功能的药物、观察药物对GJ的特异性作用提供了有力的实验手段。