重组人干扰素α2a和GFE-1多肽融合基因的克隆、表达及活性测定

目的：构建IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因表达载体，获得高质量生物产品。方法：应用聚合酶链式反应技术（PCR）对干扰素（IFN）以α2a3端酶切位点进行改造，人工合成编码能特异性高效结合肺组织的GFE-1寡核苷酸片段，二者连接后克隆入pGEM3Zf质粒，进行序列分析，将融合蛋白基因克隆入pBV220表达载体，在大肠杆菌中表达，对IFN-α2a-GFE-1表达产物纯化、鉴定及体外活性检测。结果：利用PCR的方法成功地改造了IFN-α2a3’端酶切位点，成功的将GFE-1多肽与IFN-α2a3’端连接。构建了IFN-α2a-GFE-1融合蛋白的基因克隆载体pGEM3Zf-GFE-1，DNA测序完全正确。构建了IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因原核表达载体pBV220-IFN-α2a-GFE-1，经温度诱导在大肠杆菌中有效表达。纯化了IFN-α2a-GFE-1融合蛋白，SDS-PAGE凝胶电泳检测纯度大95％，比活性达5．8×10^9／ mg。结论：IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因的成功克隆、表达、纯化和活性测定，为研制-种具有导向性治疗肺癌、肺纤维化等疾病的有效药品奠定基础。