Efeitos de noradrenalina e corticosterona in vitro sobre a atividade de linfócitos T de galinhas SPF (projeto)

Introducao: as interacoes entre o sistema nervoso central (SNC) e o sistema imune (SI) ja estao bem estabelecidas. Sabe-se que o estresse ativa o SNC que, assim, modifica a funcao imune, diminuindo a resistencia a infeccoes. Grande parte da influencia do SNC sobre o SI e exercida por dois mecanismos principais: 1) via eixo hipotalamo-hipofise ou piatuitariaadrenal (HPA), com liberacao de glicocorticoides e, 2) via sistema nervoso autonomo simpatico, com liberacao de adrenalina e noradrenalina (NE). Sabe-se que os linfocitos T apresentam receptores para glicocorticoides e noradrenalina (receptores β e α adrenergicos) e que sao modulados por essas duas substâncias. Diante disto, o presente projeto pretende dar continuidade a linha de pesquisa em neuroimunomodulacao em aves, estudando in vitro os efeitos da noradrenalina e da corticosterona sobre a fenotipagem e proliferacao de linfocitos T advindos do sangue periferico de galinhas SPF. Objetivo: avaliar os efeitos in vitro da noradrenalina e da corticosterona sobre a atividade de linfocitos T de galinhas SPF, analisando a fenotipagem e a proliferacao de linfocitos T. Materiais e Metodos: dez galinhas SPF de 21 dias de idade, alojadas em câmaras isoladas, serao submetidas a colheitas de sangue da veia jugular para posterior obtencao dos linfocitos T. As celulas mononucleares do sangue periferico (PBMC) heparinizado serao purificadas por centrifugacao de gradiente de densidade Ficoll-Paque™ PLUS, densidade 1077 g/ml. PBMC e serao marcadas com CFSE com o CellTraceTM CFSE kit. Apos lavagem, as celulas finais serao ressuspensas a uma concentracao de 1 × 107 cel/ml em meio Xvivo-15 completo. A proliferacao dos linfocitos sera avaliada apos o estimulo in vitro com concanavalin A. Apos analise da proliferacao dos linfocitos T, as celulas serao incubadas com marcadores de membrana CD3+, CD4+, CD8+, TCRγδ, CD28+ para fenotipagem em citometro de fluxo. Delineamento Experimental: Experimento A: Os linfocitos T serao incubados com: I) Concanavalin A (Con A) 5 μg/ml; II) Con A 5 μg/ml e corticosterona em quatro concentracoes diferentes: 0,01 μg/ml, 0,1 μg/ml, 0,25 μg/ml ou 1 μg/ml; III) Con A 5 μg/ml e noradrenalina em quatro diferentes concentracoes: 0,01 μg/ml, 0,1 μg/ml, 0,25 μg/ml ou 1 μg/ml; IV) Controle, linfocitos T em meio de cultura ausente de Con A, noradrenalina ou corticosterona. Apos 3 horas de incubacao a placa sera lavada e os linfocitos serao colocados em um novo meio de cultura, sendo analisados apos 120 horas de incubacao. Experimento B: Os procedimentos serao semelhantes aos do experimento A, porem apos 24 horas de incubacao a placa sera lavada e os linfocitos serao colocados em um novo meio de cultura, sendo analisados apos 120 horas de incubacao.