Purificación y caracterización de lipopolisacáridos de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83

La purificacion de lipopolisacaridos (LPS) o endotoxinas y su caracterizacion es un aspecto esencial para estudios que buscan aclarar el papel de estas biomoleculas de bacterias Gram negativas presentes en la cavidad oral y su relacion con enfermedades locales periodontales y sistemicas. Este estudio implementa una metodologia para la extraccion, purificacion y caracterizacion de LPS a partir de bacteria completa de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83, utilizando tecnicas previamente descritas. La extraccion cruda de LPS se realizo con fenol-agua caliente; la purificacion se realizo con tratamiento enzimatico con nucleasas y proteasa, seguido de cromatografia de exclusion por tamano (Sephacryl S-200 HR) con deoxicolato de sodio como fase movil. La caracterizacion de los extractos purificados se realizo por barrido espectrofotometrico, pruebas bioquimicas de electroforesis SDS-PAGE, ensayo Purpald y la prueba cromogenica de LAL. Como control para la identificacion y caracterizacion de los extractos purificados se utilizaron LPS comerciales de Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Rodobacter sphaeroides y Porphyromonas gingivalis. La metodologia implementada permitio la obtencion de LPS de elevada pureza con la identificacion de KDO o heptosas, un quimiotipo de LPS-S (liso) para E. corrodens y LPS-SR (semi-rugoso) para P. gingivalis W83. Ambos LPS purificados mostraron capacidad endotoxica a bajas concentraciones. La metodologia implementada en este estudio para la purificacion y caracterizacion de LPS a partir de bacteria completa fue eficiente al compararla con los LPS comerciales.