幽门螺杆菌ureA、ureB基因克隆、序列分析及在E.coli中表达

目的：构建含幽门螺杆菌（Hp）ureA、ureB基因重组质粒，测定、分析其核酸序列及推定的氨基酸序列，在E.coli中高效表达两基因，为检测试剂和疫苗研究提供基础依据和抗原。方法：PCR法扩增Hp菌株HPSH4的ureA、ureB基因，分别与pGEX-2T载体连接并转化大肠杆菌JM105，测定克隆基因的核酸序列并与GenBank公布的国外5株Hp菌株（26695，HPK5，J99，CPM630，M60398）的ureA、ureB基因作序列比较，以IPTG诱导，ureA、ureB基因在E.coli中高效表达。结果：ureA核酸同源性96.3％-98.1％，氨基酸同源性98.3％-100％；ureB核酸同源性95.8％-98.0％，氨基酸同源性96.4％-99.6％。以IPTG诱导，在E.coli中表达rureA融合蛋白55600D，rureB融合蛋白85500D。结论：不同地区Hp菌株的ureA、ureB存在程度不同的变异，克隆并表达HPSH4的ureA、ureB与GenBank已公布的多数Hp菌株有极高同源性，在E.coli以融合蛋白高效表达rureA和rureB。