Alkaline gel electrophoresis assay to detect DNA strand breaks and repair mechanisms in Escherichia coli

Especies reativas de oxigenio (ERO) podem induzir lesoes em diferentes alvos celulares, incluindo o DNA. O cloreto estanoso (SnCl2) e um gerador de ERO que induz letalidade em E. coli, sendo o reparo por excisao de bases (BER) um mecanismo importante neste processo. Tecnicas como o ensaio cometa (em eucariotos) e a eletroforese de DNA plasmidial em gel de agarose tem sido utilizadas para detectar genotoxicidade. No presente estudo, uma adaptacao do metodo de eletroforese em gel alcalino de agarose foi usada para verificar a inducao de quebras, pelo SnCl2, no DNA de E. coli, bem como a participacao de enzimas do BER na restauracao das lesoes. Os resultados mostraram que o SnCl2 induziu quebras no DNA de todas as cepas testadas. Alem disso, endonuclease IV e exonuclease III estao envolvidas na reparacao dos danos. Em resumo, os dados obtidos indicam que a metodologia de eletroforese em gel alcalino de agarose pode ser empregada tanto para o estudo de quebras no DNA, quanto para avaliacao dos mecanismos de reparacao associados.