Molecular Characterization of B-Acute Lymphoblastic Leukemia (B-ALL): Genomic and functional analysis of Acute Lymphoblastic Leukemia and an in vitro model of targeted genetic modification

[ES] Introduccion: Los pacientes con leucemia aguda linfoblastica se caracterizan por la presencia de una serie de alteraciones geneticas que marcan el curso de la enfermedad. Estas alteraciones son la base de los actuales sistemas de clasificacion y algunas de ellas han sido establecidas como importantes marcadores pronosticos. Ademas, el reciente desarrollo de las tecnicas omicas, como la secuenciacion masiva y los ensayos de arrays, han posibilitado el estudio de un gran numero de alteraciones geneticas recurrentes que podrian establecerse como nuevos marcadores de pronostico, ayudando en la clasificacion y estratificacion del riesgo de los pacientes y en la identificacion de predictores de la respuesta al tratamiento. A pesar de las altas tasas de supervivencia de estos enfermos, especialmente en la poblacion pediatrica, un alto porcentaje de los pacientes siguen presentando recaidas, suponiendo asi uno de los principales problemas en la clinica de la enfermedad, junto con la toxicidad al tratamiento. La recaida de la LAL-B se caracteriza por una gran heterogeneidad clonal, compuesta por un amplio numero de alteraciones que podrian estar impulsando la evolucion de la enfermedad. Aunque las recaidas se dan principalmente en los adultos, se ha reportado un alto porcentaje de ninos, portadores del gen de fusion ETV6/RUNX1 que presentan recaidas tardias. Esta alteracion es la traslacion mas frecuente de la infancia y aunque su papel en el desarrollo de la enfermedad parece estar claro, existe controversia acerca de la importancia de este en el mantenimiento del fenotipo leucemico. Mediante el desarrollo de esta tesis doctoral se emplea la combinacion de las nuevas tecnologias omicas y del sistema de edicion genetica CRISPR/cas9, con el objetivo de alcanzar una mayor comprension de las anomalias geneticas de la LAL-B tanto en el diagnostico como en la recaida. Ademas, el uso del sistema CRISPR/Cas9 proporcionara nuevos conocimientos sobre los mecanismos moleculares de las translocaciones involucradas en LAL-B, abriendo nuevas vias para el manejo de la enfermedad. Objetivos: I) Disenar y validar un panel de NGS personalizado para la deteccion de las principales alteraciones moleculares asociadas con el riesgo genetico de la LAL-B en el diagnostico. II. Estudiar el perfil genetico relacionado con la recaida de los pacientes de LAL-B a traves del estudio integrativo de mutaciones y CNVs mediante el uso combinado de la NGS, MLPA y aCGH. III. Evaluar el papel del gen de fusion ETV6/RUNX1 en el mantenimiento del fenotipo leucemico mediante la generacion de un modelo in vitro y un modelo de xenoinjerto. Los resultados de esta tesis se dividen en tres articulo publicados en revistas cientificas, de acuerdo con los objetivos planteados: Articulo I: Montano A. et al. J. Pers. Med. 2020, 10, 0137; doi:10.3390/jpm10030137. Articulo II: Forero-Castro M. & Montano A. et al. Diagnostics 2020, 10(7), 455. doi:10.3390/diagnostics10070455 Articulo III: Montano A. et al. Cells 2020, 9(1), 215. doi: 10.3390/cells9010215 …