大肠杆菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达

以大肠杆菌（Escherichia coli）W3350菌株总DNA为模板，根据已报道的几种生物的甘露醇-1-磷酸脱氢酶（mannitol-1-phosphate dehydrogenase）基因（mtlD）序列设计引物，通过PCR扩增到1条长约1．15kb的特异片断，把该片断连接到pUCm-T载体上进行测序。序列分析结果表明，该基因编码区全长1149bp，共编码382个氨基酸，与报道的mtlD基因修正序列完全一致。将该基因插入到原核表达载体pET28a（＋），IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析，发现在约45kD处明显比对照多出1条带，凝胶扫描后经Bandscan 5．0软件分析表明，该特异条带的蛋白含量占菌体可溶性总蛋白的72．9％。Western blot检测其为带组氨酸标签的融合蛋白，而质谱分析证实其为甘露醇-1-磷酸脱氢酶。转化子的耐盐能力比对照提高了约20％。该基因提交到GeneBank数据库，返回的接受号为DQ660889。