Aspekty výběru embryí a jejich příprava pro vznik lidských embryonálních kmenových buněk určených k humánní terapii

Cil prace: Prace se zabýva klinickou casti výzkumu lidských embryonalnich kmenových buněk (hESC). Cilem projektu je vznik somatických buněcných typů použitelných ve vývoji leciv, regenerativni medicině a buněcne terapii. Výhledem je umožnit cilenou terapii dosud nevylecitelne nemoci. Pluripotentni hESC maji neomezenou kapacitu pro sebeobnovu. Teto vlastnosti se využiva v terapii, kdy jsou z hESC vytvořeny chybějici nebo poskozene buňky v lidskem těle. Je zajem vytvořit hESC linie v klinicke kvalitě, použitelne v předklinických a klinických studiich. Metodika: Vytvořeni hESC musi respektovat legislativu CR a EU. Podminkou bylo vypracovat informovaný souhlas obou darců pro darovana vyřazena embrya, ktera nejsou vhodna pro lecbu oplodněnim in vitro dle směrnice 2004/23/ES. Centrum asistovane reprodukce (CAR) FN Brno se podili na odběru oocytů, kultivaci a kryokonzervaci embryi, komunikaci s klienty a zajisťovani informovaných souhlasů darců embryi. Byl vypracovan předavaci protokol a metodika předavani rozmrazených embryi s originalnim ciselným kodem. Před předanim embryi na spoluautorske pracovistě – Centrum buněcneho a tkaňoveho inženýrstvi (CTEF) ICRC FN u sv. Anny – je provedeno jejich rozmrazeni, v připadě potřeby dokultivovani do stadia blastocysty, a nasledně je proveden asistovaný hatching. Výsledky: V obdobi leden 2018 až cervenec 2020 bylo obeslano 138 vybraných vhodných klientek na darcovstvi, z nichž 52 nereagovalo, 19 ukoncilo a 29 prodloužilo skladovani embryi. Pouze 38 klientek, tj. 27,5 %, souhlasilo s jejich využitim na připravu hESC. Ve stejnem obdobi probihala osobni komunikace s vhodnými klienty CAR a bylo ziskano dalsich 17 darců embryi. Celkem bylo ziskano 160 embryi od 55 darkyň ve věku 26–42 let. Nejcastěji byla embrya zamrazena ve stadiu blastocysty (53 embrii – 33,1 %) a moruly (74 embrii – 46,3 %). Z 29 geneticky vysetřených embryi je 5 euploidnich (17,2 %), 2 mozaiky a 22 aneuploidnich nebo s translokaci ci přenaseců s monogenni vadou. Zavěr: Byl vypracovan a Etickou komisi LF MU a FN Brno schvalen informovaný souhlas, bylo vybrano a zajistěno 160 darovaných embryi. Je vypracovan předavaci protokol a metodika předavani. Plan předavani rozmrazených anonymizovaných embryi zahrnuje cca 5 rozmrazených blastocyst týdně s provedeným asistovaným hatchingem. Po předani embryi na CTEF probiha izolace embryoblastu s naslednou kultivaci. Ustanovene buněcne linie hESC musi splnit specifikovana kriteria bezpecnosti, stability a pluripotence. Věřime, že v souladu s planem projektu ziskame nejmeně tři linie hESC v klinicke kvalitě, poprve vytvořene v CR, respektujici požadavky na lecive připravky Advanced Medicinal Therapy Products (AMTP).