我国耳萝卜螺ITS及5.8S rDNA的克隆及序列分析

以采自我国黑龙江省大庆市的耳萝卜螺样品为研究对象,利用核糖体DNA（rDNA）内转录间隔区序列（ITS）的遗传标记特点,用保守引物BD1和BD2对rDNA内转录间隔区（ITS）及5.8S序列进行PCR扩增,扩增纯化后克隆至pMD18-T载体,重组质粒通过菌液PCR鉴定后,对阳性菌落进行测序和分析。结果显示,所获得的23个耳萝卜螺样品的ITS及5.8SrDNA序列总长度为1 124～1 130bp,存在一定差异,包含ITS-1（548～551bp）、5.8S（175bp）、ITS-2（399～404bp）序列。23个黑龙江省耳萝卜螺之间ITS-1序列的相似性在98.3%以上,ITS-2序列相似性在98.2%以上;而与GenBank中其他椎实螺的ITS-1序列的相似度低于75.6%,与ITS-2序列的相似度低于83.1%。由于耳萝卜螺ITS序列种内相对保守,种间差异较大,故可作为椎实螺种间遗传变异研究的标记。本研究结果为耳萝卜螺的分类鉴定以及进一步的分子流行病学研究奠定了基础。