Evaluation et analyse moléculaire de la résistance au tributylétain de bactéries hétérotrophes isolées de sédiments lagunaires

Le tributyletain (tbt), utilise dans les peintures antisalissures, est un compose biocide pour les organismes eucaryotes et procaryotes qui s'est accumule dans les sediments du port d'arcachon. Ce travail a permis d'identifier, parmi les clostridia, pseudomonas et enterobacteries de ces sediments, des souches resistantes au tbt susceptibles d'intervenir dans la speciation de ce compose, et le mecanisme moleculaire de cette resistance. Le niveau de sensibilite au tbt des souches isolees a ete evalue en comparaison avec d'autres souches de meme espece isolees d'environnements non pollues par le tbt. Les clostridia sont apparus de 30 a 100 fois plus sensibles au tbt que les pseudomonas et les enterobacteries. Aucune difference significative n'a ete observee entre la sensibilite au tbt des souches temoins et celle des souches identifiees. Cependant, 6 souches de p. Stutzeri ont presente une cmi du tbt de 20 a 40 fois plus importante que la cmi de toutes les autres souches de pseudomonas sp. Et ont donc ete considerees comme resistantes au tbt. Aucune resistance acquise a un antibiotique ou a un metal lourd n'a pu etre detectee, impliquant que la resistance au tbt dans ces souches n'etait pas liee a la resistance a une autre molecule bactericide. De meme, aucun plasmide n'a ete mis en evidence, suggerant que la resistance au tbt de ces 6 souches etait codee par un ou plusieurs gene(s) chromosomique(s). Le clonage du ou de ces gene(s) a ete entrepris a partir de l'adn total de la souche de p. Stutzeri la plus resistante au tbt. Un seul clone a ete obtenu, dont le sequencage de l'insert a revele l'existence de 3 cadres ouverts de lecture (orf), orf. A, orf. B et orf. M, semblant former un operon. La recherche d'identite realisee sur les 3 sequences proteiques a montre qu'elles presentaient des similarites avec les composants des systemes d'efflux multi-drogue decrits chez p. Aeruginosa et e. Coli. La transformation d'une souche de p. Putida sensible au tbt avec l'operon orfabm lui a confere la resistance au tbt. La recherche de l'operon orfabm a ete realise par pcr et hybridation sur les 20 souches de pseudomonas isolees dans cette etude. L'operon orfabm a ete detecte dans 2 souches de p. Stutzeri sensibles au tbt et 3 des 6 souches de p. Stutzeri resistantes au tbt. Comme cet operon n'a pas ete detecte dans 3 des 6 souches resistantes au tbt, d'autres genes doivent etre responsables de la resistance au tbt, suggerant une possible diversite dans le mecanisme moleculaire de cette resistance.