siRNA干扰人BMP9重组腺病毒载体的构建及其促进乳腺癌SK-BR-3细胞增殖

目的筛选特异性干扰人BMP9基因的siRNA序列并制备重组腺病毒AdsiBMP9，探讨RNAi人BMP9基因后对乳腺癌SK-BR03细胞增殖能力的影响。方法设计制备3对干扰人BMP9的双链DNA序列，亚克隆至Pses-Hus质粒中获得Pses-Hus-siBMP9质粒，脂质体转染乳腺上皮细胞HBL-100筛选有效干扰质粒，构建重组腺病毒并感染SK-BR-3细胞，RT-PCR，Westernblot检测BMP9表达，M1T11检测细胞增殖能力。结果成功构建并筛选出针对人BMP9基因的有效干扰质粒并包装成腺病毒，病毒滴度为1×1010IU／mL，感染SK—BR-3细胞显示BMP9在转录水平和翻译水平表达量显著低于对照组和空白组（P〈0．05），第5天AdsiBMP9组细胞的增殖率显著高于AdsiNC组（P〈0．05）。结论成功构建特异性沉默人BMP9基因的siRNA腺病毒载体，可有效抑制SK-BR-3细胞中BMP9基因的表达从而促进该细胞增殖。