Role of c3g in the differentiation and maturation of megakaryocytes

C3G es un activador de varios miembros de la superfamilia Ras, principalmente de Rap1 y R-Ras. Estudios anteriores sugieren que C3G juega un papel en diferentes procesos de diferenciacion celular, como la diferenciacion de celulas de neuroblastoma a neuronas o la diferenciacion adipocitica, actuando a traves de su principal diana Rap1. La implicacion de C3G en la diferenciacion y maduracion megacariocitica se ha estudiado mediante el uso de dos modelos experimentales: lineas celulares hematopoyeticas K562 y HEL transfectadas con distintas construcciones de C3G que lo sobreexpresan o silencian y ratones transgenicos para C3G y C3GΔCat (mutante de C3G delecionado en el dominio catalitico o GEF), donde ambos transgenes se encuentran expresados bajo el promotor del gen PF4 (platelet factor 4), exclusivo de megacariocitos y plaquetas. Los estudios en lineas celulares, utilizando PMA como estimulo de diferenciacion, han revelado que la proteina C3G tiene un papel regulador positivo en la expresion de marcadores megacariociticos CD41 y CD61, en el incremento en la poliploidia celular mediado por p21 y en la adquisicion de determinadas caracteristicas morfologicas, todos ellos cambios que contribuyen al compromiso hacia el linaje megacariocitico. Dichos cambios se producen a traves de las vias de senalizacion de Rap1 y PI3K y son independientes de la activacion a traves de PKC. Ademas, PMA, promueve la fosforilacion de C3G en la Tirosina-504, lo cual se encuentra relacionado con la activacion sostenida de la via de senalizacion Rap1-ERK1/2 que ocurre en etapas tardias de la maduracion megacariocitica. Los estudios en los modelos transgenicos para C3G y C3GΔCat, han confirmado lo observado en las lineas celulares. Celulas procedentes de la medula osea de los ratones transgenicos para C3G, pero no procedentes de los ratones C3GΔCat, muestran un incremento en la expresion de CD41 y CD61 tras el tratamiento con trombopoyetina. Ademas, la expresion transgenica de C3G incrementa el porcentaje de megacariocitos maduros con alto contenido en ADN. Adicionalmente, mediante el uso de explantos de la medula osea se observo un incremento en la migracion de los megacariocitos maduros desde el nicho osteoblastico al vascular y una mejora en la produccion de proplaquetas en los ratones tgC3G frente a sus correspondientes controles. Por el contrario los megacariocitos procedentes de explantos de medula osea de ratones C3GCat presentaron una menor migracion, asi como una menor formacion de proplaquetas. Estos resultados sugieren una participacion de C3G en diferentes aspectos clave de la megacariopoyesis a traves de un mecanismo mediado por su actividad GEF.