Microscopie sted avec excitation pulsée, stimulation continue et alignement déclenché d'une lumière de fluorescence émise spontanément

Selon l'invention, dans un microscope a lumiere de fluorescence STED, des impulsions de lumiere d'excitation (3) sont appliquees a un echantillon, ces impulsions excitant des entites fluorescentes contenues dans l'echantillon pour la fluorescence, et etant focalisees sur au moins une zone focale. En outre, une lumiere de desexcitation (12) est appliquee a l'echantillon, laquelle desexcite les entites fluorescentes excitees, et comprend un point d'intensite nulle dans la ou les zones focales, sous la forme d'une onde continue. Une lumiere de fluorescence emise par les entites fluorescentes excitees dans l'echantillon est alignee apres chaque impulsion de la lumiere d'excitation (3), et elles se chevauchent avec l'application de la lumiere de desexcitation (13) avec une definition temporelle elevee entre des impulsions consecutives de la lumiere d'excitation (3).