中华鳖 StAR 基因的克隆、表达及多克隆抗体制备

为探索StAR基因在中华鳖性腺发育过程中的作用，利用RACE技术克隆获得中华鳖StAR基因全长cDNA，qRT-PCR分析其在不同组织及胚胎不同发育时期的表达情况，并制备多克隆抗体，采用Western blot检测StAR在不同组织中的表达情况，通过免疫组化进行定位，同时检测来曲唑处理雄性中华鳖后StAR在精巢中的表达情况。结果显示，该基因全长2 377 bp，开放阅读框903 bp，编码300个氨基酸。氨基酸序列比对及系统进化分析表明，中华鳖StAR与龟类亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果表明，StAR基因在精巢中表达量最高，显著高于其他组织；StAR基因于中华鳖胚胎发育16期已有表达，早于性腺分化启动时期；来曲唑处理的中华鳖精巢中，StAR表达量先上调后回降。本研究利用原核表达系统构建中华鳖StAR基因原核重组表达载体，经蛋白纯化后免疫小鼠，获得中华鳖StAR多克隆抗体。Western blot检测结果显示StAR在不同组织中的表达量与荧光定量结果一致。免疫组化结果显示，StAR蛋白在卵巢间质细胞、精巢间质细胞，精原细胞及胞质中表达。综上所述，StAR基因可能是中华鳖性腺分化关键调控因子，并在类固醇激素合成及精子发生过程中起到重要作用。