表达人肿瘤坏死因子受体II-Fc的CHO-DG44细胞的培养温度优化研究

目的优化表达人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc（TNFR—Fc）融合蛋白的重组CHO—DG44细胞的培养温度，并考察该细胞株在最佳温度放大培养下纯化后的产物纯度及活性。方法采用批次培养方式，将重组中国仓鼠卵巢细胞培养于37℃、37℃转31℃、31℃3种不同的温度下，每日取样检测细胞密度、细胞活率、葡萄糖浓度、乳酸浓度、人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白浓度，并选择最佳的培养温度对重组中国仓鼠卵巢细胞进行放大（10、50、200mL、2L）培养，所得培养上清经ProteinA亲和色谱柱纯化，并采用SDS—PAGE，SE—HPLC，WST-8对人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白进行相对分子质量，纯度和生物活性检测。结果研究发现，37℃转31℃的转温度培养条件可在保持高密度活细胞的同时维持细胞活率，延长培养周期，显著提高人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白产量，并且该转温度培养工艺可成功地应用于重组CHO细胞的规模放大培养中。纯化后的人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白相对分子质量约为150×10^3，纯度在93％以上，生物活性检测显示其可中和重组人肿瘤坏死因子“的细胞毒效应。结论相比单一的37℃培养条件，37℃转31℃的转温度培养工艺可明显提高重组CHO—DG44细胞的人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白表达量，且该工艺具有可放大性，这为该工艺的更大规模应用奠定了基础。