肠出血型大肠埃希菌O157：H7 Tir的表达、纯化及不同免疫途径对其免疫效价的影响

目的克隆、表达和纯化肠出血型大肠埃希菌（enterohaemorrhagic E．coli，EHEC）O157：H7转位紧密黏附素受体蛋白（Tir），观察不同免疫途径对其免疫效价的影响，为EHEC0157：H7亚单位疫苗的研究提供了实验资料。方法扩增tir基因，克隆到pET．30a（＋）载体上，转化至大肠埃希菌BL21／DE3，诱导表达目的蛋白，通过Ni—IDA亲和层析进行纯化；将重组蛋白Tir免疫小鼠，检测血清和粪便提取物中抗体效价。结果双酶切和测序鉴定结果均显示重组质粒pET-30a（＋）-tir构建成功。SDS-PAGE结果表明，目的蛋白Tir在大肠埃希菌BL21（DB3）中得到表达。皮F免疫和鼻腔免疫小鼠，血清中均能检测到高效价的IgG类抗体，鼻腔免疫组小鼠血清和粪便IgA类抗体效价明显高于皮下免疫组。结论Tir蛋白具有一定的免疫原性：