ДВА МЕХАНИЗМА КАЛЬЦИЕВЫХ КОЛЕБАНИЙ В АДИПОЦИТАХ

В невозбудимых клетках известно несколько видов агонист-индуцируемых колебаний концентрации цитозольного Ca2+ ([Ca2+]i), которые различаются по форме и по механизму их генерации. Источником колебаний, как правило, является регуляция мобилизации Са2+ из внутриклеточных запасов через рецепторы инозитол-1,4,5-трисфосфата (IP3R) и в некоторых случаях – через рианодиновые рецепторы (RyR). В настоящей работе изучены колебания в одиночных зрелых адипоцитах эпидидимального жира мышей на девятый день культивирования. Клетки стимулировались ацетилхолином (ACh) или эмбриональной коровьей сывороткой (FBS). ACh в концентрации 0.1–5 мкМ вызывал рост [Ca2+]i до некоторого пика и последующие колебания, у которых максимумы и минимумы постепенно опускались вместе с ростом амплитуды, а частота уменьшалась. В большинстве клеток колебания длились менее 5 мин. Новый постоянный или межспайковый уровень был выше исходного или равным ему (при 1 мкМ ACh). Удаление ACh сразу прекращало колебания. Ингибитор фосфолипазы C (U73122) и ингибитор IP3R (ксестоспонгин C) не влияли на характер ответов, откуда следует, что генерация колебаний не зависит от IP3. В то же время наблюдалось подавление ответов рианодином, блокирующим RyR. Кроме того, колебательные ответы устранялись ингибиторами ADP-рибозилциклазы, фосфатидилинозитол-3-киназы, NO-синтазы и cGMP-зависимой протеинкиназы. FBS (1%) инициировала колебания, для которых характерны возвращение [Ca2+]i после каждого пика к базальному уровню, существовавшему до стимуляции, а также сохранение примерно одинаковой амплитуды и частоты (порядка 1 мин-1). Колебания продолжались дольше (более 15 мин у 87% клеток), чем с ACh. Повторная стимуляция клеток посредством FBS выявила сильно сниженную чувствительность через 1 ч покоя, тогда как ответы на AСh частично восстанавливались через 3 мин. Исследование участия IP3R и RyR в FBS-индуцируемых колебаниях дало полностью противоположные результаты относительно ACh и продемонстрировало ведущую роль IP3R без существенного вклада RyR и путей его активации. С обоими стимулами вход Са2+ через плазматическую мембрану необходим лишь для поддержания колебаний. Результаты показывают, что в адипоцитах различные агонисты могут задействовать различные подсистемы кальциевой сигнализации, каждая из которых генерирует колебания, имеющие свой специфический временной ход.