羊草 CDPK 基因全长cDNA的克隆及原核表达

目的 通过对羊草Leymus chinensis CDPK基因进行克隆及原核表达，为进一步研究CDPK基因的功能，探讨羊草适应生境分子机制提供理论基础. 方法 用RT-PCR结合RACE技术克隆了羊草钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因，命名为Lc-CDPK; 构建了羊草CDPK基因的原核表达载体，转化到大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3)，异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后，经SDS-PAGE分析CDPK蛋白的表达情况. 结果和结论 羊草CDPK基因全长cDNA序列为1 704 bp，包括1个1 647 bp的开放阅读框，编码548个氨基酸，从第81~339个氨基酸构成了具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性的S-TKc结构域，有4个保守的EF手型结构域; 编码区核苷酸序列与其他禾本科作物比对后发现，与小麦CDPK基因的相似性最高，相似度为96%; IPTG诱导表达出相对分子质量为61 350的融合蛋白，表达产物大小与预计理论值相符.诱导7 h蛋白表达量最高，表达量占菌体总蛋白的49.1%.