Determinación de la fosfatasa ácida tartrato resistenteen muestras óseas decalcificadas de cerdo Susdomesticus.

Introduccion: Las tecnicas de Inmunohistoquimica son hoy en dia una de las herramientas mas importantes en el diagnostico histopatologico, sin embargo la manipulacion de las muestras y el metodo de procesamiento puede llevar a cambios en la estructura de las proteinas que llevan a enmascaramiento de antigenos, dificultando la identificacion con anticuerpos. Entre los diferentes metodos de recuperacion antigenico propuestos en la literatura, el de calor humedo con Vaporera ha tenido gran aceptacion por su simplicidad, control y bajo costo. Objetivo: En el presente trabajo se propone un protocolo de recuperacion antigenica con calor humedo, en muestras de tejido oseo que ya habian sido previamente fijadas en formaldehido, decalcificadas con etilendiaminotetraacetico (EDTA), e incluidas en parafina. Materiales y metodo: Se utilizaron muestras de tejido oseo de cerdo que habian sido preparadas con tecnicas convencionales, pertenecientes a la coleccion del laboratorio de patologia de la Universidad del Valle. Se realizo refijacion en glutaraldehido y se empleo una vaporera para intensificar la exposicion de antigenos. Se utilizo como anticuerpo primario el anti TRAP de DEKO®, monoclonal, originado en raton, y como secundario el KIT UltraVision LP Large Volume Detection System HRP Polymer ®. Resultados: En todas las muestras expuestas al anticuerpo primario en diluciones 1:20 y 1:40 se observo inmunotincion de celulas mononucleares compatibles con pre osteoclastos, y celulas gigantes multinucleadas compatibles con osteoclastos. Conclusiones: La recuperacion antigenica con calor humedo es un metodo confiable en la recuperacion antigenica de muestras oseas fijadas con formaldehido. Palabras claves: Inmunohistoquimica, recuperacion antigenica, anticuerpos, fosfatasa acido tartrato resistente, TRAP. SUMMARY Introduction: Nowadays, Immunohistochemistry are one of the most important techniques in the histopathological diagnosis. Despite of handling and processing cautions, both of them may generate changes in the protein structure, masking antigens, preventing antibody identification. Among different antigen retrieval methods proposed by the literature, the humid heat with Steamer has been widely accepted for its simplicity, control and low cost. Objective: In this paper a protocol for humid heat antigen retrieval use in bone tissue samples that had been previously fixed in formaldehyde, decalcified with ethylenediaminetetraacetic (EDTA ), and embedded in paraffin is proposed. Materials and methods: Samples of pig’s bone that had been prepared with conventional techniques, from the collection of the pathology laboratory of the University of Valle were used. New fixed process was performed in glutaraldehyde and a steamer was used to enhance antigen exposure. The anti-TRAP DEKOs ®, mouse monoclonal antibody was used as primary antibody, and the KIT UltraVision LP Large Volume Detection System HRP Polymer ® was used as a secondary antibody. Results: In all samples exposed to primary antibody in 1:20 and 1:40 dilutions immunostaining mononuclear cells compatible with preosteoclasts were observed; immunostaining multinucleated giant cells consistent with osteoclasts were described. Conclusions: Humid heat for antigenic recovery is a reliable method for the recovery of bone antigen samples fixed with formaldehyde. Key words: Immunohistochemistry, antigenic recovery, antibodies, tartrate resistant acid phosphatase, TRAP