Determinación de la fosfatasa ácida tartrato resistenteen muestras óseas decalcificadas de cerdo Susdomesticus.
2014
Introduccion: Las tecnicas de Inmunohistoquimica
son hoy en dia una de las
herramientas mas importantes en el diagnostico
histopatologico, sin embargo la
manipulacion de las muestras y el metodo
de procesamiento puede llevar a cambios
en la estructura de las proteinas que llevan a
enmascaramiento de antigenos, dificultando
la identificacion con anticuerpos. Entre
los diferentes metodos de recuperacion antigenico
propuestos en la literatura, el de
calor humedo con Vaporera ha tenido gran
aceptacion por su simplicidad, control y
bajo costo.
Objetivo: En el presente trabajo se propone
un protocolo de recuperacion antigenica
con calor humedo, en muestras de tejido
oseo que ya habian sido previamente fijadas
en formaldehido, decalcificadas con etilendiaminotetraacetico
(EDTA), e incluidas
en parafina.
Materiales y metodo: Se utilizaron muestras
de tejido oseo de cerdo que habian sido
preparadas con tecnicas convencionales,
pertenecientes a la coleccion del laboratorio
de patologia de la Universidad del Valle.
Se realizo refijacion en glutaraldehido y
se empleo una vaporera para intensificar
la exposicion de antigenos. Se utilizo
como anticuerpo primario el anti TRAP de
DEKO®, monoclonal, originado en raton,
y como secundario el KIT UltraVision
LP Large Volume Detection System HRP
Polymer ®.
Resultados: En todas las muestras expuestas
al anticuerpo primario en diluciones
1:20 y 1:40 se observo inmunotincion de
celulas mononucleares compatibles con
pre osteoclastos, y celulas gigantes multinucleadas
compatibles con osteoclastos.
Conclusiones: La recuperacion antigenica
con calor humedo es un metodo confiable
en la recuperacion antigenica de muestras
oseas fijadas con formaldehido.
Palabras claves: Inmunohistoquimica,
recuperacion antigenica, anticuerpos, fosfatasa
acido tartrato resistente, TRAP.
SUMMARY
Introduction: Nowadays, Immunohistochemistry
are one of the most important
techniques in the histopathological diagnosis.
Despite of handling and processing cautions,
both of them may generate changes
in the protein structure, masking antigens,
preventing antibody identification. Among
different antigen retrieval methods proposed
by the literature, the humid heat with
Steamer has been widely accepted for its
simplicity, control and low cost.
Objective: In this paper a protocol for
humid heat antigen retrieval use in bone
tissue samples that had been previously
fixed in formaldehyde, decalcified with
ethylenediaminetetraacetic (EDTA ), and
embedded in paraffin is proposed.
Materials and methods: Samples of pig’s
bone that had been prepared with conventional
techniques, from the collection of
the pathology laboratory of the University
of Valle were used. New fixed process was
performed in glutaraldehyde and a steamer
was used to enhance antigen exposure. The
anti-TRAP DEKOs ®, mouse monoclonal
antibody was used as primary antibody,
and the KIT UltraVision LP Large Volume
Detection System HRP Polymer ® was
used as a secondary antibody.
Results: In all samples exposed to primary
antibody in 1:20 and 1:40 dilutions immunostaining
mononuclear cells compatible
with preosteoclasts were observed; immunostaining
multinucleated giant cells
consistent with osteoclasts were described.
Conclusions: Humid heat for antigenic
recovery is a reliable method for the recovery
of bone antigen samples fixed with
formaldehyde. Key words: Immunohistochemistry, antigenic
recovery, antibodies, tartrate resistant
acid phosphatase, TRAP
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