MÉTODO DE EXTRAÇÃO DE DNA DE AMOSTRAS CÉRVICO-VAGINAIS

O Papilomavirus humano e um virus DNA do grupo papovavirus, sendo considerada a doenca viral sexualmente transmissivel mais frequente na populacao sexualmente ativa. Havendo mais de 120 tipos reconhecidos atualmente, dos quais 30 podem infectar o trato genital quando relacionados a outros meios, faz-se relacao ao desenvolvimento das neoplasias intraepiteliais e do câncer invasor do colo uterino, da vulva, da vagina e da regiao anal. Cerca de 80% das mulheres terao contato com HPV, sendo a maioria com idades entre 20 e 40 anos. O exame de Papanicolau e um metodo importante para o diagnostico do HPV, porem, devido as suas limitacoes, existem outros meios baseados na identificacao do DNA. Existem estudos basicos sobre tecnicas de extracao de DNA e, dependendo da necessidade, e necessario modificacoes e adaptacoes nos protocolos, visando uma melhoria na quantidade, qualidade e na viabilidade de amplificacao de DNA pela tecnica da PCR para poder, assim, obter um diagnostico mais preciso do HPV. O objetivo de nosso estudo consiste em analisar dois diferentes metodos de extracao de DNA de amostras cervico-vaginais. Ja em relacao a metodologia, foi realizado um estudo observacional e transversal e as amostras cervico-vaginais foram obtidas de mulheres que realizaram o exame de Papanicolaou no Servico Integrado de SaUde (SIS) da Universidade de Santa Cruz do Sul (UNISC), no periodo de fevereiro a marco de 2015. A coleta foi realizada por ginecologistas ou enfermeiras por raspagem da mucosa cervico-vaginal, com auxilio da espatula de Ayre ou escovas do tipo cytobrush, sendo armazenadas em tubos contendo solucao tampao TE a -20oC, ate realizar a extracao de DNA. As amostras foram submetidas a dois protocolos diferentes para padronizacao de extracao de DNA. O primeiro foi utilizando o Kit comercial de extracao Wizard Genomic DNA Purification (PROMEGA). Ja o segundo protocolo foi o Metodo de Digestao Enzimatica com Proteinase K adaptado a partir do protocolo de Mahonyet al. (1993), sendo esta uma padronizacao in house com menor custo. Foram extraidos DNA de cinco amostras e, dentre os protocolos testados, o Kit de extracao Wizard Genomic DNA Purification nao foi eficiente para extrair a quantidade de DNA satisfatorio para possibilitar a realizacao da reacao de PCR, gerando uma media de 8,59 ng/µL (DP ± 4,76). O segundo protocolo adaptado de Mahony et al. (1993) obteve uma media de 115,64 ng/µL (DP ± 15,36), gerando resultados mais eficazes e um maior rendimento. Com base nos resultados obtidos, e possivel perceber uma significativa diferenca entre os dois metodos testados, onde destacou-se o protocolo de Mahony et al. (1993) sendo o com maior eficiencia, e que gerou resultados mais satisfatorios para a realizacao da PCR.