Preselección del sexo en caballos: Identificación de factores limitantes: Sex preselection in horses: identification of limiting factors

espanolEl sexaje de espermatozoides por citometria de flujo es una tecnica valorable en reproduccion equina. Sin embargo, es probable que este danando el espermatozoide. Mientras que la tincion con H33342 durante 90 minutos afecta la motilidad y otros parametros cineticos, el proceso de sexaje afecta principalmente la membrana plasmatica, incrementando su permeabilidad. Estas alteraciones causan la muerte celular precoz, ademas de relacionarse con un incremento en el estres oxidativo. De hecho, se registro en el semen sexado un incremento en la cantidad de especies reactivas de oxigeno producidas, oxidacion y fragmentacion del ADN. Tambien ocurrio un incremento en la subpopulacion espermatica con potencial de membrana mitocondrial reducido. En esta tecnologia, el estres oxidativo aparentemente dana el ADN, induciendo muerte celular. Ademas, se obtuvieron resultados semejantes tras la refrigeracion de muestras tenidas durante 20h, antes del sexaje. Esto representa una nueva opcion para el empleo de esta tecnica, permitiendo el envio de semen refrigerado al centro de inseminacion. Finalmente, ambas muestras de espermatozoides (control y sexadas) se unieron de forma igual a los ovocitos de porcino. Sin embargo, la reactividad del acrosoma se incremento y los patrones de fosforilacion cambiaron en las muestras de semen sexado. Estos datos apuntan para una mayor destabilizacion del plasmalema, posiblemente relacionada con la capacitacion. La membrana del espermatozoide parece ser el organulo mas afectado tras el sexaje, acelerando la muerte prematura por un aumento en el dano oxidativo y genomico. La prevencion de este dano podra incrementar el tiempo de vida de los espermatozoides sexados. EnglishFlow cytometric sex sorting is a valuable technique to use on equine reproduction. Nevertheless, the effects that it causes on the spermatozoon are not negligible. While staining with H33342 for 90 minutes affects total and progressive motility, and other kinematic parameters, the sorting procedure itself mostly damages the plasmalemma. These damages cause an increase in the permeability of the plasmatic membrane. Apart from inducing premature cell death, these membranary alterations are probably related to an increase in the oxidative stress. Indeed, total ROS production, genomic oxidation and fragmentation were increased in sex sorted semen. Also, an increase in the subpopulation of spermatozoa with lower mitochondrial membrane potential was also registered. In this technology, oxidative stress apparently induces DNA damage and cell death. Moreover, approximately the same results were obtained after 20h refrigeration of stained samples, prior to sorting. This provides a new option for the sorting procedure, allowing shipping of refrigerated stallion semen to the insemination centre. Finally, binding to porcine oocytes was approximately equal between sorted and unsorted samples. However, acrosomal reactivity was increased in sorted stallion spermatozoa, and tyrosine phosphorylation patterns were also altered after sorting. Both data account for an advanced status of membrane destabilization, possibly related to capacitation. The plasmalemma appears to be the most affected organelle after the sorting procedure. Destabilization of the membrane hastens premature death, probably through increased oxidative stress and genomic damage. Prevention of this damage should be considered, as it could increase the lifetime of sorted cells.