Identificación de un gen codificante de polifenol oxidasa (PPO) en Theobroma cacao L. (cacao) de Ecuador

espanolEn Ecuador, las plantaciones de cacao presentan bajos promedios de produccion debido a la diversidad de patogenos, especialmente a la infeccion por Moniliophthora roreri (monilia). Se cree que existe una relacion entre el ataque del hongo y el aumento de los niveles de expresion de genes codificantes de polifenol oxidasas (PPOs) como mecanismo de defensa ante patogenos y herbivoros en diferentes plantas. Para la identificacion de genes que codifican para PPOs, se seleccionaron hojas de cacao Nacional, provenientes de plantas resistentes y susceptibles a monilia, ubicadas en la Finca Experimental La Represa, propiedad de la Universidad Tecnica Estatal de Quevedo. Se afino un protocolo de extraccion de ARN total de alta calidad para hojas de cacao recalcitrantes. Despues de su retrotranscripcion a ADNc, se realizaron ensayos de amplificacion por PCR con diferentes primers, disenados a partir de secuencias conservadas de PPOs. Los productos de amplificacion permitieron la identificacion de un gen de 961 pb, similar a un gen que codifica para la PPO predictiva de Theobroma cacao depositada en NCBI (XP_017978715.1) La identificacion de este gen, es fundamental para evaluar a futuro los niveles de expresion y cuantificacion en diferentes estados de desarrollo del fruto. Dicha cuantificacion permitira proponer herramientas de control para monilia y construir las bases para el mejoramiento genetico del cacao Nacional. EnglishIn Ecuador, cocoa plantations have low production averages due to the diversity of pathogens, especially the infection by Moniliophthora roreri (monilia). It is believed that there is a relationship between the attack of the fungus and increased levels of expression of genes encoding polyphenol oxidases (PPOs) as a defense mechanism against pathogens and herbivores in different plants. For the identification of genes that code for PPOs, National cocoa leaves were selected, from resistant and susceptible plants to monilia, located in the Finca Experimental La Represa, property of the Universidad Tecnica Estatal de Quevedo. A high-quality total RNA extraction protocol was recalculated for recalcitrant cocoa leaves. After its retrotranscription to cDNA, PCR amplification assays will be carried out with different primers, from the conserved sequences of PPOs. The amplification products allowed the identification of a 961 bp gene, similar to a gene that codes for the predictive PPO of Theobroma cacao deposited in NCBI (XP_017978715.1). The identification of this gene is essential to evaluate future levels of expression and quantification in different stages of fruit development. This reading quantification will propose control tools for monilia and build the bases for the genetic improvement of the National cacao.